Tehnike

Testiranje pripomočki in naprave za zbiranje telesnih tekočin (Nechiporenko, 1999)

Algotest količinsko biološko aktivnost kemičnih spojin (Barashkov, Kiristaeva 1977)

priprava vzorcev za analizo več elementov metodoloških navodil ruske zvezne sanitarna inšpekcija Center Muk 4.1.1483-03

Postopek Formulacija določanju svinca v celotni krvi s ICP-MS raztopini izotopa (Velikonočna s sod., 1995)

Analiza Postopek multielement krvnih frakcij

Določitev jem spojine (Prebsting and Gavrilova Timofeeva Postopek modifikacije za določanje aktivnosti N-acetiltransferazo) (Pershyn 1971)

Testiranje pripomočki in naprave za zbiranje telesnih tekočin (Nechiporenko, 1999)

Preskusne posode (cevi, vial), brizge tip "lopute" sistemi (plastične brizge in cevi).

1. Vehikel: zmes 1% HNO₃ in 0,001% Triton X-100. Pripravljena z uporabo destilirane vode. 10 ml HNO₃ (Stopnja reagenta) dodamo k 500 ml čiste vode v merilni bučki 1 liter. Nato dodamo 1 ml Triton X-100. Po raztapljanju smo prostornina zmesi naravnamo na 1 liter.

2. Za testiranje plastičnih brizg, zabojnikov kapilare notranjosti je predmet izdelan in 1 ml vehikla se prenese v epruveto. V primeru, da vzdržujemo raztopino notranjosti vsebnika obrnjenega za pokrivno ali vtičnega posode za 12-14 ur. Pri testiranje kovinskih igel se skozi 1 ml raztopine. Nato vse analitov posamično testiran za vsebino kovin.

3. Vsi izračuni so bili izvedeni na 1 ml raztopine. Skupna vsebnost skupne kovine v vseh naprav naj ne presega 5% povprečne enakovredno izračunano stopnjo vsebnosti kovine v biološkem vzorcu.

Algotest količinsko biološko aktivnost kemičnih spojin (Barashkov, Kiristaeva 1977)

V certifikat spodaj opisani izumiteljev № 557098. pridobljene v algotest 1977 g. Čeprav tehnično, ta metoda ni zelo zapletena, je potrebno izpolniti več pogojev, zlasti, da se zagotovi prisotnost lyuminostata (kontinuiranih fluorescentne razsvetljave fluorescentne sijalke z intenzivnostjo 3700 erg / cm² sek, temperatura inkubacije 29 ± 3 ° C) in imajo izkušnje z algami.

Testna mezofilnih organizem sev zelenih alg Chlorella pyrenoidosa 82 iz zbirke kavarne. MSU mikrobiologija. To se gojijo 3 dni pod stalno svetlobo, za žarnico z močjo 10. januarja⁵ ergs / cm² s pri 28 ° C polna Tamiya okolje sečnina in dodal, mikroelementi V Arnon-4 raztopine.

Pred poskus alg celic (sredi log fazo rasti) ločimo iz medija s centrifugiranjem (3 tys.ob / min, 1200g, 5 min), sprali z 0.01% natrija NaCl in razredčena 5-krat Predpostavka-1 medij s pH okoli 7,0, je popolnoma brez organskih dodatkov.

Optimalna koncentracija alg celic za največje občutljivosti (10 maj⁵ - 10. april⁶/ Ml), kar ustreza 15-40 enot "indeks silikagel" (SP), ki je enako maso suspenzije v CSC penjenega silicijevega dioksida mg / ml z enako optično gostoto pri 578 nm kot suspenzijo alg.

Pri ocenjevanju strupenosti snovi ali zmesi Možna povezane z topnosti testnih snovi. Snov vodotopen uvedemo v tekočo zmes pri koncentracijah, ki se razlikujejo ena bi, na primer, 10, 1, 0,1, 0,01 mg / ml. V vodi netopna snov sverhrastvoritele dajemo na primer dimetilsulfoksid (DMSO) ali dimetilformamid (DMF). koncentracija Sverhrastvoriteley ne sme presegati 3% zaradi svoje inherentne toksičnosti.

Kuhan eksperimentalni in kontrolni z enako začetno gnojevke SP₍₁ zlijemo v 20-25 ml širokimi usti bučk ali Erlenmey-EPA (50-100 ml) ali v standardnih epruvete v stojala preglednih, zaprta z bombažem in inkubiramo pri 85-95 lyuminostate uri. Tehnično primeren in zadovoljiv za statistično obdelavo ponoviti vsako možnost 5-krat.

Potem ko so bile inkubacijske bučke (ali cevi) postavi v kopel Ultrazvočni čistilnik in ultrazvočno obsevali 10-15 sekund z 100 W, da dobimo homogeno suspenzijo. Opredeljujejo JV izkušnje in kontrolnega sistema (JV_K) Z absorbance pri 578 nm (ali število celic). Izračuni s formulo izvedba:

kadar% T₂ - sprememba v odstotkih od časa kulture podvojila. Pozitiven rezultat kaže na prisotnost zastoj rasti in toksičnih učinkov, negativno - pozitivno vplivati.

Kritična koncentracija (C_cr) So grafično. Os ordinata predstavlja izračunane vrednosti% T₂ (Nad 0 - pozitivno, nižji - negativna) in absciso - koncentracije preskusne snovi na logaritemski skali. Kraj presečišče segmenta črte med točkami, ki so bolj ali manj vrednosti% T₂ 5% ravni, ki je vzporedna z osjo absciso daje vrednost K_cr- 5% je sprejeto kot kritično raven zaradi dejstva, da so nekatere snovi, ki ne povzročajo jasne stimulativen učinek in zmanjša pod 5 povečuje relativna napaka pri določanju.

Zelo primeren izraz Posledica tega je, poleg K_cr, Izračun vzorca toksičnost glede na toksičnost bakrovega sulfata do "Tox" (T_z), Navedena v isti vrsti poskusov: T_z = K^z_cr/ K_cr. Izbor serijsko strupenosti modela CuSO₄ Zaradi dejstva, da ta material izpolnjuje naslednji zahtevi: 1), da je najbolj razširjen kot model fluora in 2) zagotavlja jasno vrednost K^z_cr vsaj razlika med toksičnimi in stimulativno koncentracijah.

POTE: Iz pojavi selektivna toksičnost, je razvidno, da je univerzalni preskusni organizmi ne obstajajo. Znane teste, kot so test z bolho, ki temeljijo na določanju LD₅₀, ki praktično omogoča nastavitev kritično koncentracijo preskusne snovi, tj višji organizem, ki je inhibirana pomembna dejavnost. Poleg tega je treba test organizem za poskuse v standardni fiziološkega stanja v vsakem letnem času. Ta zahteva je najbolj primerna za single-celično zelenih alg.

Uporaba mezofilnih vrst Chlorella omogoča povečati občutljivost biološkega testa v primerjavi s katero koli drugo za več kot dva reda velikosti, na zelo preprost način. Pre-sev gojimo v kompletnem mediju s sečnino, da je mezotrofne. Celice smo nato sprali brez medija in premakne v slaba avtotrofna Pogoji, ki jo podvržemo dvojno fiziološko šok.

Potreba po uvedbi notranjega standarda toksičnost izhaja iz nezmožnosti za izvajanje poskusov v različnih letnih časih, v enakih pogojih. K^z_cr To se razlikuje od poskusa eksperimentiranja, vendar v večini primerov je približno 3 mg CuSO₄/ L.

priprava vzorcev za analizo več elementov metodoloških navodil ruske zvezne sanitarna inšpekcija Center Muk 4.1.1483-03

Za pripravo vzorcev z uporabo ICP-MS je treba uporabiti jedi fluorove temeljito izperemo v ultrazvočni kopeli razredčenega 1: 1 HNO₃ in sprali trikrat z deionizirano H₂O.

Izbor, shranjevanje in priprava vzorcev

lasje pripet na zadnji strani glave v višini >0,1 g, obdelamo z acetonom 10-15 minut, izperemo 3-krat z deionizirano H₂Oh.

nohti zmanjšati z obema rokama, in obravnavati na enak način. Obe predmeti so shranjeni v papirnate kuverte.

krvi iz lakti vene v količini >1 ml, shranjenih v hladilniku za 3-5 dni ali v zamrzovalniku (18 ° C) ali liofiliziramo. Pri dolgotrajnem skladiščenju smo vzorce dali v polipropilenska cevi s tesnimi pokrovi.

Prav tako obdelan kri pri pripravi zdravil eritrocitov, plazma in sera, in vzorec mleko, seme, limfa, slina.

urin (Zjutraj ali dan) v količini, ki ni manjša od 5 ml damo v zaprti plastični posodi v hladilniku do 3 dni ali zamrznjen.

biopsije mišični, koža, epitelijska, jetma, in drugi. takoj po pripravi stehta, v zapečateni plastične posode in shranjen v hladilniku za 3-5 dni ali zamrznjen.

Vzorci kosti in zob damo v zapečateni plastične embalaže iz laboratorija.

preparati aminokisline, multivitaminov, BAS in surovine za njihovo proizvodnjo je v proizvajalca paketa. Najmanjša masa 10 g trdnih pripravkov, tekočin - 100ml.

Odpri razpad vzorcev

Lasje, nohti in drugi. Trdni vzorci. Del vzorca damo v teflonsko valj dodamo 0.2-1.0 ml koncentrirane HNO₃, zaščitni pokrov laboratorijsko film in damo v termičnega bloka na 0,5-1,0 ur pri temperaturi 115 ° C do popolnega raztapljanja. Raztopljeno vzorec smo kvantitativno prenesli v merilno cev in vodne izpiralne tekočine naravnamo na volumen 10 ml, nato - po analizi.

Video: Max OT. tehnike treniranja

tekočih vzorcev. Natančno stehtani vzorci (0,1-0,5 ml) damo v teflonsko valj, določanje teže vzorca cevi razliko masnega pred in po pripravi vzorca. Dodamo 0.3-1.0 ml koncentrirane HNO₃ in homogenizirali vzorec, kot je opisano zgoraj.

Da bi preprečili odlaganje proteinov in nadomestitev visoko vzorcev viskoznih omogočiti preprost redčenje vzorca z deionizirano vodo, čemur sledi nakisanje s faktorjem redčenja od vsaj 1: 100.

mikrovalovni razkroj

Natančno stehtani vzorec se postavi v teflonsko podlogo, 5 ml HNO₃ in dal v mikrovalovni pečici. Razkroj se izvaja s strani proizvajalca programa (običajno 5 minut pri 200"C) kvantitativno prenesli v epruveto in volumen naravnamo na 10 ml z vodo. Vzorec 1 ml naravnamo do volumna 10 ml 0,5% HNO₃ in analizirali.

Dovoljeno zračna izbor alikvot razkroji volumna vzorca 0,1-0,5 ml. Za kompenzacijo napak pred razpadom razredčevanje vzorca uveden interni standard (V, Rh) Koncentracije analita v končni raztopini je približno 10 g / l. Rešitev notranjega standarda, je treba dodati, da vse eno in kalibracijskih raztopin.

Popravek Isobar prekrivanje, polihidrogenski prekrivne in hrup

Tehnike Motnje odpravljanje napak z določitvijo standardnega dodatka in merjenje serijsko razredčimo serijo vzorcev zaznana.

popravek izobarno Prekrivne proizvaja avtomatično, v skladu s paketi opreme instrumentov za ICP-MS. Natančni korekcijski koeficienti določi eksperimentalno.

popravek polihidričnega prekrivne zahteva pozornost operaterja za odpravo motenj. Naprave z reakcijsko celico odstranimo večino poliatomskih prekrivanja načeloma. Posebne metode za različne izvedbe ročno odstraniti motnje so znani in so prikazani v ustreznih navodilih obstoječega napravo.

hrup s popravljanjem največjo možno redčenje in ozadja normalizacijo kislino. Uporaba internega standarda odpravlja vzorčne napake redčenje in vključujejo veliko matričnega vpliva na plazmi in ionsko toka.

Kalibracija instrumenta, merjenje, analiza meritev in opravlja notranje operativnega nadzora opisano v ustreznih navodilih za instrument. proizvajalci opreme za izvedbo ustreznega usposabljanja za izvajalce v okviru pogodbe za dobavo opreme.

Postopek Formulacija določanju svinca v celotni krvi s ICP-MS raztopini izotopa (Velikonočna s sod., 1995)

Natančno stehtani vzorec polna kri dve 0,5 V enem dodamo približno 100 mg raztopine (približno 100 ul) iz 983 standarda SST vsebuje 92.15 na.% ²⁰⁶Pb do končne koncentracije okoli 1 mg Pb/ G. V dveh alikvotih smo dodali 2 ml koncentrirane ultrapure HNO₃ in spali v mikrovalovni pečici v ponderiranih PTFE plovil.

Ostanki ohladimo, prenesemo v 15 ml epruveto in razredčimo na 10 ml z vodo. Alikvote smo analizirali s ICP-MS in določimo razmerje ²⁰⁸Pb/²⁰⁶Pb. koncentracija Pb v originalnem vzorcu je bila izračunana po naslednji formuli:

kjer je [Pb] - koncentracija Pb v neznanem vzorcu v ng / g,

K - razmerje relativne atomske mase naravne Pb z relativno atomsko maso Pb v vzorcu z dodano ²⁰⁶Pb (A_r = 206,063)

c_s - koncentracija Pb v vzorcu z dodano ²⁰⁶Pb v ng / g,

m_sp - teža (g) dodamo raztopino ²⁰⁶Pb,

m_sm - teža (g) prvotnega vzorca,

0,0125 - relativna vsebnost ²⁰⁸Pb v vzorcu z dodatkom SRM 983

0.921497 - relativna vsebnost ²⁰⁶Pb v isti raztopini,

208/206 (y) - razmerje v dodani raztopini,

₂₀₆ in A₂₀₈ - naravna vsebnost ²⁰⁶Pb in ²⁰⁸Pb v originalnem vzorcu.

Analiza Postopek multielement krvnih frakcij

za plazma značilno v standardni plastična cev struktura pripada antikoagulant (heparin-Na ali -li sol, K₂-EDTA Trilon B = 9NC Na citrat, oksalat) Pridobite vzorec krvi. Celice morajo biti v najkrajšem možnem času ločimo s centrifugiranjem, kot kratkotrajnega učinka heparina in antikoagulanta znatno spremenila elementarno sestavo seruma. Pri dolgotrajnem shranjevanju vzorcev krvi v hladilniku je zgodi neizogibno Postopek po hemolize, in v zamrzovalnik krvnih celic so uničeni.

za sera omogoči vzorec krvi koagulirajo ( "Curl '), nakar se fibrinskega strdka ločimo skupaj s celicami. Če želite Filtrat brezbeljakovinski (BBF), nato na 1 del krvi dodamo 9 delov 5% TCA (STS). Oborino protein odstranimo s centrifugiranjem (2 th. Obr / min, 10 min). Za določitev elementov supernatanta smo uporabili.

0,5 ml krvi ali plazme ali seruma damo v viali mikrovalovni dodamo 4,5 ml 30% HNO₃. vsebina mineralizirana (Npr, v mikrovalovni pečici podjetju Berghof Speedwave ™ MWS-2 program P₆ Postopek 3 korakih (25 min)).

Mineralizirane Raztopino razredčimo s 5% HNO₃ 10 ml (redčenja z 20-kratno) in se uporabljajo za določanje ICP-MS.

pripombaV primeru rezultatov izven obsega za posamezne elemente analita razredčenih. Vse razredčitve upoštevati pri zaključnih minutah rezultatov.

Določitev jem spojine (Prebsting in Gavrilova Timofeeva Postopek modifikacije za določanje aktivnosti N-acetiltransferazne) (Pershin, 1971)

reagenti:

1) 15% trikloroocetna kislina (TCA)

2) Raztopino 0,5% NaNO₂

3) nasičeno raztopino CH₃COONa (1 del soli raztopimo v 2,8 delih H₂O)

4) 0,5% raztopina acetiliran H-kislina (1,8-aminooksinaftalin-3,6-disulfonska kislina) (pripravljen na dan poskusa)

5) raztopino 7-10% HCl

6) Glavni standardna raztopina

10 mg sulfadimezin norsulfazola ali damo v merilno bučko 100 ml in 2,1 ml 0,1 N NaOH da se popolnoma raztopi sulfanilamida. dolili destilirano H₂O do oznake, to se pravi pred koncentracijo zdravila 100 ug v 1 ml raztopine. Raztopino shranimo v hladilniku.

Umeritvena krivulja je bila zgrajena z uporabo serije raztopin za študij zdravila za analizo vzeti photoelectrocolorimeter (FEC) z modrim filtrom, npr 10-8-6-4-2 ug / ml.

Predmet je podan 1-2 tablet sulfametoksazola drog, ter zbrali dnevni urin. Cev je napolnjena z 0,2 ml urina dodamo 2 ml raztopine №1 + 1 № 5 ml in 6,8 ml destilirane H₂O. Po mešanju in filtriranju 1 ml filtrata ustreza 0,02 ml urina.

Analiza prostega sulfanilamida. V epruveto zlijemo 2,5 ml filtrata urina zlijemo 0,1 ml raztopine № 2, mešamo in po 10 min zlijemo 1,5 ml raztopina № 3 in ponovno zmeša. Takoj, 0,25 ml raztopine № 4. Ko se pojavi temeljito mešanje rožnato obarvanje. Po 15 minutah, je svetilnost, izmerjena na FEC z modrim filtrom.

Delovni standardi obravnavajo Tate enako. Z umeritvene krivulje se je koncentracija prostega zdravila izračuna ob upoštevanju vseh razredčitve.

Analiza celotnega sulfanilamida. Po prejemu zdravila v telesu subjekta acetiliranega N-acetiltransferazne. Ta del se lahko določi šele po hidrolizo. V epruveto zlijemo 2,5 ml vzorca in 0,25 ml № 5. Podobno deluje tudi pri standardnih raztopin. Cev z zmes damo v vrelo vodno kopel za 30 minut. Po ohlajenju smo volumen tekočine v cevi naravnamo na 2,5 ml destilirane H₂O. Nadaljnje delo z raztopino po metodi določanja prostega sulfanilamida.

Umeritvene krivulje izdelana s standardno delovno raztopino po hidrolizi se meri celotno količino drog (prosta in acetiliranega) v vzorcu. Po odšteje količino prostega zdravila dobljenega v višini acetiliranih priprave %% glede na celotno.

Medicinska bioneorganika. GK ovce