GuruHealthInfo.com

Fiziologija mikroorganizmov: lastnosti kulture bakterij, izolacija čistih kultur mikroorganizmov

Kulturne lastnosti bakterije

Do kulture (ali macromorphological) lastnosti vključujejo značilnosti rasti mikrobov na trdnih in tekočih hranilnem gojišču. Na površini trdnih medijev hranil, odvisno od kulture, lahko mikroorganizmi rastejo kot kolonij, kapi ali neprekinjeno travnik.

Kolonija imenuje izolirano skupek celic ena vrsta, ki raste iz ene same celice (klon). Odvisno od tega, kje raste mikroorganizem (na površini trdnih hranilnem gojišču ali v debelejši) razlikovanje površine, globino in spodnjem kolonijo.

Kolonije, ki rastejo na površini medija, so različni: so za posamezne vrste in njihova študija se uporablja za določitev posebnega dodatka za kulturo v okviru študija.

Pri opisovanju kolonije upoštevati naslednje lastnosti:
1) Colony oblika - okrogla, amebastem, rizoidnaya, nepravilna, itd;..

2) velikost (premer) kolonije - zelo majhen (točka) (0,1-0,5 mm), majhen (0,5-3 mm), srednje velikosti (3-5 mm) in velika (več kot 5 mm premera );

3) Colony površina - je gladka, groba, nagubanega, nagubana, z koncentričnih krogih ali radialno progami;

4) Kolonije profil - ravna, izbočena, stožčasta, crateriform itd;..

5) preglednost - svetlorumene, mat, gladek, transparentna, praškasti;

6) Barva kolonije (pigment) - brezbarvni ali pigmentirani (bela, rumena, zlata, rdeča, črna), poudarjajo izbor pigmentu v mediju s sijaj;

7) Rob kolonija - gladka, valovita, nazobljenimi, obrobljen, itd;..

8) struktura kolonija - homogeni, fine ali redkejšo, struychataya- rob in struktura kolonija določimo z uporabo povečevalno steklo ali mikroskop z nizko povečavo z dajanjem petrijevko s setvijo na odru mikroskopa navzdol pokrov;

9) ugotovi skladnost kolonii- dotika zanko: kolonija je lahko gosta, mehka, vraščanje v agar, sluznice (zanka odsekih), krhko (lahko razdeljena na stiku z zanko).


Globoke kolonije pogosto podobni bolj ali manj sploščena lenticelami (obrazec elipsi s konicami), včasih kose volne s nitki priveski do medija kulture. Nastanek globokih kolonij pogosto spremlja pretrganja gosto medija, če mikroorganizmi izoliran plin.

Spodnje kolonije imajo običajno obliko tankih prozornih folij, plazeče vzdolž dna.

Funkcije kolonije se lahko razlikujejo glede na starost, ki so odvisne od sestave medija in temperaturo kulture.

Rast mikroorganizmov v tekočih medijih upoštevala, s pomočjo štirih-sedemdnevno kulturo goji v stacionarnih pogojih.

V tekočem mediju v času rasti mikroorganizmov opazimo motnost medija, tvorbo filma ali ostanka.

Ko je zrasla na pol (0,5-0,7% agar) hranil medijske mobilne mikrobi povzročajo izrazit meglica, še vedno v obliki, raste le v času sajenja Kurac v sredo.




Pogosto je mikrobna rast spremlja vonj pigmentaciji srednje dioksida. Značilnim vonjem nekaterih kulturah bakterij, povezanih z oblikovanjem različnih estrov (uksusnoetilovogo, uksusnoamilovogo et al.), Indol, merkaptan, vodikov sulfid, skatol, amoniak, maslene kisline.

Sposobnost, da se tvori pigmentov je inherentna v mnogih vrst mikroorganizmov. Kemijska narava pigmentov različni, karotenoidi, antocianini, melanins. Če pigment je netopen v vodi, obarvajo kulture nalet- samo, če je topen, barvane in hranilni medij. Menijo, da so pigmenti zaščito bakterije iz uničujočega delovanja sončne svetlobe, tako da je zrak, kolikor pigmentiranih bakterij, poleg tega pigmenti sodelujejo pri metabolizmu teh mikroorganizmov.

V naravi so ti fosforescentne kultur bakterij, ki svetijo v temi zelenkasto-modro ali rumenkaste svetlobe. Take bakterije najdemo predvsem v reki ali morju. Za svetlečih bakterij - photobacteria -otnosyatsya aerobne bakterije (Vibrio, koki, drogovi).

Izolacija čistih kultur mikroorganizmov

Čista kultura se imenuje kulture, ki vsebuje mikroorganizem vrste. Izolacija čiste kulture bakterij -Required korak bakterioloških raziskav v laboratoriju, naj preuči različne mikrobne kontaminacije okolja, in na splošno za vsako delo z mikroorganizmi.

Testni material (voda, tla, zrak, hrana ali drugih predmetov) običajno vsebuje mikrobe regiji.

Izolacija čiste kulture nam omogoča preučevanje morfoloških, kulturne, biokemične, antigenske in druge značilnosti, glede na celoto, ki jo določajo vrste in vrste članstva patogena, tj. E. proizvedenih njegovo identifikacijo.

Za izolacijo čistih kultur mikroorganizmov se uporabljajo tehnike, ki jih lahko razdelimo v več skupin:
1. Postopek Pasteur - serijska razredčitev testnega materiala v tekočem hranilnem mediju v koncentraciji od ene celice v volumnu (zgodovinski pomen).

2. Postopek po Koch ( "ožičenje plošča") - serijska razredčitev testnega materiala v agarju staljeni (temperatura 48-50 C), čemur sledi polnjenje v petrijevko kjer agar strdi. Oddajanje znamke, kot pravilo, treh ali štirih zadnje razredčitve, kjer bakterije postane malo v prihodnosti, z rastjo petrijevk videti izolirane kolonije so oblikovani iz enega od prvotnega matične celice. Od izoliranih kolonij v globino agar so čiste kulture bakterij na svežem posevki okolje.

3. Postopek Shukevich - uporabi za pridobivanje čiste kulture Proteus in drugih mikroorganizmov, ki imajo "plazeče" rast. Sejanje preskusni material za izdelavo kondenzirane vode na dnu naklona. Premikajoči se bakterije (Proteus) so lahko hodili gor nagnjena kulture, še vedno oblike še vedno raste na dnu, na mestu cepljenja. Subkulture zgornje robove kulture, je mogoče pridobiti čisto kulturo.

4. Postopek Drigalski - pogosto uporabljajo v bakteriološki praksi test snov razredčili v epruveto s sterilno fiziološko raztopino ali juhe. Ena kapljica prvega materiala uvedemo v skodelico s sterilno stekleno lopatico in vžiga na celotni površini medija. Nato enako lopatice (ne gori skozi njo v plamen gorilnika) izvede isti pridelek v drugem in tretjem plošč.

Z vsak inokulacijo bakterij na lopatico manj in manj, in nanese na tretji pokal, bodo bakterije se porazdeli po površini gojišča kulture ločeno drug od drugega. Po 1-7 dni v inkubatorju držimo skodelice (odvisno od hitrosti rasti mikroorganizmov) v tretjem skodelico daje vsaka bakterija celičnega klona izoliramo tvorjenja kolonij, ki kultivirajo na agarju poševno, da bi zbrali čiste kulture.

5. Postopek Weinberg. Posebne pojavijo težave pri dodeljevanju čistih kultur obvezuje anaerobov. Če stik z molekulskega kisika ne povzroči takojšnjo smrt celic, pridelek, proizvedenega po postopku po Drygalski, nato pa takoj postavi v skodelico anaerobno. Vendar pa večina so vzrejo način. Njegovo bistvo je v tem, da je redčenje gradiva izvaja v staljeno in ohladimo do 45-50 ° agar medija.

Naj serijske razredčitve 6-10, potem je medij v ceveh hitro ohladimo in zlijemo površinski sloj mešanice parafin in vazelin oljem, da se prepreči vdor zraka v notranjost hranilnem mediju. Včasih je gojišče po sejanje in mešanje prenesemo v sterilno epruveto ali kapilarne Burri Pasteurjevo pipeto, katere konci so zaprti. Če uspešno vzrejo v cevi, cevi Burri, Pasteur pipete anaerobi rastejo izolirane kolonije. Uporaba Gojišča, pojasnili, da so bile izolirane kolonije jasno vidna.

Za ekstrakcijo izoliranega kolonije anaerobi cev segrevanju rahlo rotacijo v plamenu, z agarjem, ki mejijo na stenah in vsebina epruvete topi kot agar stolpec zdrsne v sterilno petrijevko. Stolpec agar se reši s sterilnimi pinceto in odstranimo zanke kolonijo. Pridobljeni kolonije so bili dani v tekočem mediju, ugodno za razvoj mikroorganizmov dodeljenih. Agar medij piha iz cevnega BURRI, prehajanje plinov skozi bombažni vložek.

6. Postopek po Hungate. Če želijo dobiti izolirane kolonije bakterij s posebej visoko občutljivost za kisik (strogo aerobne) z uporabo metode vrtenje Hungate cevi. V ta raztaljenega agarsko gojišče inokulirano z bakterijami pri konstantni tok skozi cev inertnem plinu sproščenega iz kisika nečistočo. Cevko smo nato blokirali z gumijevim prekatom in postavi vodoravno v objemko, ki se vrti probirku- sredo z enakomerno porazdeljenih vzdolž sten cevi in ​​tankoslojno strdi. Uporaba tanko plast cevka, napolnjena z zmesjo plinov omogoča dobimo izolirane kolonije vidne s prostim očesom.

7. osamitev posameznih celic z uporabo mikromanipulatorjem. Mikromanipulator - naprava, ki omogoča mikropipeto ali posebne mikropetli odstranitev ene celice iz gošče. Ta operacija je nadzorovan pod mikroskopom. V fazi mikroskopa določi vlažnosti komoro, v kateri je zdravilo dano "visi kapljice". Imetnikov delujejo stativi fiksna mikropipeto (mikropetli), katerega gibanje v vidnem polju mikroskopa, ki s mikronov natančnost zahvaljujoč sistemu vijakov in vzvodov. Raziskovalec videti v mikroskopom, posamezne celice mikropipete pridobi in jih prenese v epruvete, ki vsebujejo sterilnega tekočega medija, da dobimo klon celic.

LV Timoshenko, MV Chubik
Zdieľať na sociálnych sieťach:

Príbuzný