Preskus Trombin generacije

Ta metodološki pristop je britanski raziskovalci predlagal leta 1953, da oceni stanje sistema hemostazo v hemofilijo. Opozoriti je treba, kljub temu, da je bila predlagana metoda v izvirniku zelo daleč od popolnosti, tako da za dolgo časa, ona ni bila dana resno pozornost. Druga metoda rojstva preživela zahvaljujoč Hemker Conrada, ki je dosegla številne izboljšave v postopku analize v 90. letih prejšnjega stoletja. Najpomembnejša sprememba Hemker K. s sod. je uporaba flyuoro- in kromogenih substratov za odkrivanje generacijo trombina, ki znatno povečano ponovljivost metode. V predloženem izvedbenem primeru postopek po trombin nastane med reakcijo uniči peptidnim substratom, ki povzroča sproščanje molekule fluorofor. sprememba intenzivnost emisij zazna z fluorometru v rednih časovnih presledkih.

Princip metode

Test temelji na ohranjanju hitrosti hidrolize peptidne vezi fluorogene substrata specifična za trombin. Določitev substrata fluorometru cene Zlom poteka v vdolbino ploščo s 96 vdolbinami, pri kateri zmes inkubirali PRP vzorca z koagulacijski aktivatorja. Ker uporaba aktivatorja rekombinantnega tkivnega faktorja reagenta in kalcijevega klorida in standardizirati in izboljša stopnjo koagulacije v testnem sistemu dodamo fosfolipide. Študij kinetike proizvodnje trombina nam omogoča oceniti ravnovesje prokoagulacijski in antikoagulantov mehanizmov.

Reagenti in oprema

• Rekombinantni tkivnega faktorja humani (1 pmol).
• Specifična trombin fluorogena substrat.
• Pufer raztopina, ki vsebuje kalcijev klorid.
• Kalibrator z dejavnostjo humani trombin 580 nmol.
• Fluorometer.

Vzorce krvi za raziskave

Kot vzorčni snemanje thromboelastogram uporabo BTP. Številne študije, da se upošteva prispevek trombocitov v generacijo trombina priporočamo uporabo trombocitov bogate plazme. Test je zelo občutljiva na pomanjkljivosti in ima predhodno analitično fazo študije.

Video: predavanje 29 - Testna generacije metode

tehnika uspešnosti

Preiskovalni postopek se izvaja v skladu z navodili za opremo, ki se uporablja, in algoritma računalniškega programa, ki izračuna dinamiko glavnih kazalnikov generacije trombina.

Vrednotenje rezultatov študije

Fluorogena substrat specifična za trombin, da sprememba intenzivnosti luminiscentne po dodatku koagulacijski aktivatorja sorazmerna s stopnjo nastajanja tega ključnega koagulacijskega encima.

Po umeritvene standardno količino trombina fluorometru omogoča gradnjo krivulje generacijo trombina. Študija je ocenila zakasnitev tvorbe trombina (časovni zamik), največjo količino trombina (trapez trombina), čas za dosego največje trombina (ttPeak), kot tudi trombina potencial endogenega (ETP).

Razlaga rezultatov ankete

Ker koagulacijski faktor je ključni encim v koagulacijski hemostazo, preskus trombin generacija je dragocen pokazatelj integralnega strjevanja krvi.

Rezultati testov so odvisni od načina aktivacije koncentracije aktivator strjevanja krvi, in mnogih drugih dejavnikov, tako spreminjajoče se razmere tehnika omogoča, da se prilagodi za odkrivanje različnih napak v strjevanja sistemu. Tako je dodatek trombomodulin v testnem sistemu pomaga prepoznati hiperkoagulabilno premike v ozadju leydenovskoy mutacij. Študij generacijo trombina v trombocitov, bogatih plazmi omogoča odkriti disfunkcije hemostaze trombocitov Glantsmana Glanzmannovi, Bernard-Soulier sindroma in drugih.

Najpogosteje uporabljena aktivacija koagulacije BTP tkivnega faktorja, ki omogoča, da oceni stanje koagulacije. Ta rezultat je pri bolnikih s časom hemofilijo in druge koagulopatije ukrep Lag se podaljša, in ETP in Peak trombin zmanjša. Intenzivnost teh sprememb teh bolnikov je odvisna od aktivnosti koagulacijskih faktorjev VIII in IX.

Vzroki napak

Napake preanalytical fazo študije, v Vol. H. napačne odmerke citrata na ograji venske krvi.

• Napake centrifugiranjem pri pridobivanju PRP vzorcev.
• Stik s heparinom preučevali kri iz venski kateter.
• Hemoliza.

Druge analitične tehnike

Trenutno razviti druge analizne tehnike, ki lahko vizualizacijo procesa strjevanja, kot načinu snemanja rasti prostorsko strdka in thromboelastography. Vse te tehnike vizualizacijo strjevanje krvi in ​​so sposobni za izračun integralnih parametrov strjevanja krvi, vendar je njihova diagnostična specifičnost je še vedno nizka.