Endokrinologijo proteolitičnih encimov učinek na metabolno aktivnost možganskih celic in nevtrofilnih levkocitov albino podgane

Znano je, da imajo proteolitični encimi (tripsin, himotripsin, in drugi) v nekaterih primerih izrazito protivovospalitelnoedeystvie. V zvezi s tem relativno proteaz encimi shirokoispolzuyutsya za zdravljenje različnih vnetnih bolezni skupin: Bronhopulmonalne, ginekološke, stomatološka, ​​opuholevyhprotsessov (2,7,14), kot tudi pri preprečevanju vnetja v kirurgiji (6). Mehanizmi Medtem profilaktično in terapevtskih deystviyaproteoliticheskih fermentv vnetni procesi ostayutsyanedostatochno študiral. Najbolj popolnoma osvetljen in vloga literature argumentirovanav nekroze in fibrinolitična (trombolitično) učinka proteaze pri njihovem protivnetnim učinkom (5,6). Vendar pa je v literaturi je le malo dokazov o neposrednem učinku proteaz na metabolicheskuyuaktivnost celic.

Delo je bilo namenjeno eksperimentalno issledovanievliyaniya tripsin in kallikrein na aerobnogookisleniya encimske aktivnosti v živčnih celic in makrofagov, ki igrajo vodilno preprečevanje Rolv vnetja (gematoentsefalicheskiybarer).

Materiali in metode.

Poskuse smo izvedli na 61 bele samci podgan prebivalstva Vistarmassoy 200-250 g Doseženi 10 seriji poskusov: 6 serije - nadzor, ki raziskali dehidrogenaze v sistemu leykotsitahi nevtrofilcev "nevron-nevroglija" mozgaintaktnyh korteks živali z intraperitonealno injekcijo 0,85% natrijevega rastvorahloristogo inaktiviran tripsina in kalikreina (39krys) - serija 4 - eksperimentalni pri kateri degidrogenazneyrotsitov aktivnost preučevali z intraperitonealno injekcijo aktivne tripsin in kalikrein, kot tudi aktivnost dehidrogenaze in vsebnostjo glikogena v neytrofilnyhleykotsitah podgane z intraperitonealno injekcijo testne aktivnyhfermentov (24 živali). Testne droge dajali od rascheta50 mikrogramih na 100 gramov teže živali. Študija metabolična nervnyhkletok korteksa nevtrofilnih levkocitov osuschestvlyalispustya podganah 6 ur po intraperitonealni aplikaciji preskus preparatov.Rezultaty poskusov so prikazani v tabelah N1 in N2.

Ko histokemična študija predmet izucheniyasluzhil oddelku podganjih možganih, sprejeti v levi peredneytsentralnoy gyrus. Za histokemična analizo smo pripravili kriostatnyesrezy 15 mikronov debel pri -20^oC v mikrotome- kriostateMK-25 po običajni metodi [9]. možganska skorja celice mozgakrys laktata bila odkrita dehidrogenaze, postopek glitserofosfatdegidrogenazypo Hess, Scarpelli, Pierce [9] in suktsinatdegidrogenazypo postopek Nahlasa [8]. Aktivnost dehidrogenaze ocenjevala pokontsentratsii formazana granul v oddelkih objektov. Kontrolspetsifichnosti degidrogenazprovodili histokemične detekcijo aktivnosti na kriostat odsekih možganskega tkiva, ki inkubirovaliv delovne raztopine v odsotnosti specifičnega substratovokisleniya njej. Obračunavanje histokemične reakcije pomočjo dehidrogenaza osuschestvlyalis cytophotometry pri valovni dolžini 512 nm, zonda0,1 premer cm, leča 40 [1]. Ocena zgolj kemijskih reakcij otsenivaliv absorbančne enote. Pri določanju aktivnosti belih podgan krvi nevtrofilnih granulocitov degidrogenazv raziskati aktivnostSDG [15], LDH in za metodo TPD Hess et al. [8] sprememba predlagana Borisova MA s sod. [3,4]. Cytochemical vyyavlenieglikogena v nevtrofilnih levkocitov smo izvedli po metodi Hotchkiss-Shabadash [11,13]. Končna ocena cytochemical Reakcijsko osuschestvlyalipo načeloma Kaplow L. [14]. Polimorfi v zavisimostiot stopnjo aktivnosti encima je razvrščena:
1. stopnja - v citoplazmi individualne pelete vsebujejo formazana.Aktivnost encim zanemarljiv (slika 1a).
2 stopinj - formazana zrnca zasedajo manj kot pol tsitoplazmykletok. V tej skupini so celice, ki vsebujejo majhne (prah) vsebuje ali zelo svetlo obarvano difuzna masa (1b).
3. stopnja - vključki izražene levkocitov pri reakcijskih produktov, ki zasedajo več kot polovico citoplazmi nevtrofilcev (Fig.1c).
4 stopinj - izražen celic z vključki reakcijskih produktov obsegati celotno citoplazme nevtrofilcev levkocitov. Aktivnostfermenta visoka (ris.1g). Rezultati raziskav statistike različic obrabatyvalimetodami.

Rezultati in razprava.

Intraperitonealno injekcijo podgan povzročila povečanje tripsina ilikallikreina v neurocytes in celic neyrogliibolshih cerebralno polobel encimska aktivnost aerobnogookisleniya - LDH 27,2% (p < 0,001), на 18,2% (р < 0,002)соответственно. Активность ЛДГ в изучаемых клетках больших полушарийголовного мозга под действием трипсина и калликреина снизиласьна 27,8% (p < 0,025) и на 16,3 (р < 0,001) соответственно.Активность ГФД в нейроцитах и клетках нейроглии больших полушарийголовного мозга снизилась на 26,0% (р < 0,01) только под действиемтрипсина. Введение калликреина также вызвало уменьшение данногоцитохимического показателя на 5,3% (р < 0,05).

Rezultati študije so predstavljeni v tabeli obobschenyi. N1.
Učinek tripsina in kalikrein o dehidrogenaze, nevroglija sistemeneyrotsit možgansko skorjo podgan in vivo (P +/- m).

Opomba: števec - dejavnost degidrogenazv pogojni običajne enote v imenovalec - sprememba indeksa v zvezi s kontrolno protsentahpo. Za serijo eksperimentov N3,4 - nadzor yavlyaetsyaseriya N2. Serija N5- serija N3. Za serijo N6 - N4 serije. (*) - p < 0,05- (**) - р < 0,025- (***) - р < 0,01- (****)- р < 0,002- (*****) - р < 0,01.

Podatkov Primerjava histokemična issledovaniyameta parabolično aktivnost možganskih celic in krvnih belyhkrys preučevali delovanje proteaz ugotovljene enake kazalnike napravlennostizuchaemyh. Parenteralno dajanje tripsinai kalikreina živali v odmerku 50 mg na 100 g telesne mase povzročil suschestvennyysdvig sistem presnovo in nevrona-nevroglija in lubja golovnogomozga in nevtrofilcev v smeri povečanja aerobna oksidacije vosstanovitelnyhprotsessov, kot je jasno dokazuje povečanje aktivnostiSDG, ključni encim oksidativne fosforilacije. Uchityvayapryamoe kininogenaznoe ukrep krvi tripsin in kalikrein [12], lahko sklepamo, da smo ugotovili cytochemical izmeneniyav celice skorji možganskih polobel podganjih obuslovlenybiologicheskim delovanja kininov, ki verjetno pronikayutcherez krvno-možgansko pregrado in se spodbuja nevronskih procesov tkaniaerobnye redoks.

Zmanjšano aktivnost LDH, ključni encim aerobnogookislitelnogo encim v celicah v možganih in krvi belyhkrys z učinkovanjem tripsina kaže, da je ta fermentpri parenteralno dajanje inhibira glikolize v celicah s specifičnostjo razlichnoyfunktsionalnoy.

Znano je, da je v primerjavi z večino drugihkletok telo v vseh levkocitov glikolitičen prevraschenieuglevodov prevladuje nad oksidativne fosforilacije. Udelnyyves glikoliza je več kot 60% skupaj energeticheskihprotsessov [10].

Tabela 2.
Spremembe dehidrogenaze in vsebnost glikogena v neytrofilnyhleykotsitah belih podgan pod učinkovanjem tripsin in kalikrein (M +/- m) - (v enotah aktivnosti Kaplow)

Opomba: V vsaki seriji issledovaniyi se uporablja pri kontroli 6 živali. Pomembnost razlik: p < 0,001.

1. Parenteralno dajanje majhnih odmerkov tripsina horoshoizuchennymi skupaj s terapevtske lastnosti, zavira anaerobne energeticheskiyobmen nevtrofilci inhibirajo migracijo levkocitov proces ochagvospaleniya in tako prepreči širjenje vospalitelnogoprotsessa.
2. Učinek malih odmerkov tripsin povečuje antitripticheskuyu aktivnostgomogenata možganskih polobel podgan in ima vyrazhennyylechebny protivnetni učinek.
3. Majhnih odmerkih kalikrein, kot nizkih odmerkih tripsin snizhayutaktivnost LDH in TPD nevtrofilcev levkocitov in možganov Homogenat stimuliruyutantitripsinoliticheskuyu mozgakrys dejavnostih, ki omogoča kalikreina v majhnih odmerkih, kot tudi tripsin, uporabimo kot protivnetno sredstvo.

Reference

1. Agroskin LS Papayan GV Cytophotometry: oprema in metodyanaliza od absorpcije svetlobe celic. - Leningrad. Znanost, 1979.- 259 str.
2. Baumhakl U.S. Fodemar, Kreychova H. encim ostryhi kroničnih vnetnih procesov v knjigi: sistemska encimskega zdravljenja: raziskave in klinično prakso. Uredil K.Nouza, ZA. Masinovsky, R. Nouza. - München. - Praga. - 1994. - S. 27-30.
3. Borisova MA, Ovcharenko NI, zdravilišča AS Vsaka supravitalnyesposoby cytochemical določitev aktivnosti sukcinat dehidrogenaze laktatdegidrogenazyi krvničk // Lab. posel. - 1975.- N- 12. - S. 723-725.
4. Borisova MA, Ovcharenko NI Shpak SI et al. Supravitalnyesposoby cytochemical določanje aktivnosti alfa-glitserofosfatdegidrogenazyi glukoza-6-fosfat dehidrogenaze v levkocitih perifericheskoykrovi // Lab. posel. - 1983. - N- 9. - str 8-10.
5. VF Veselov, VA Protsenko Učinek proteolitičnih encimov uux inhibitorje na privzem kisika možganskega tkiva podgan in eeantitripticheskuyu aktivnost // Ukr. Biochem. Zh. - 1981. N 4. - str 106-108.
6. Wolf, M., K. Zdravljenje Ransberg encimi. - Moskva: Mir, 1976.- 233 str.
7. Dittmar DF Adneksitisa v knjigi: Sistemska encimska terapija: študije-niyai klinična praksa. Uredil K. Nouza, ZA. Masinovsky, P. Nouza. - München. - Praga. - 1994. - S. 35-36.
8. E. Pierce histokemija Teoretično in uporabno. Moskva: Inostr.liter, 1962.- 962 str ..
9. Fedorov NA Normalno hematopoeze in njeno ureditev. - Moskva: Medicine, 1976 - 543 str.
10. Shabadash AL Citološki in cytochemical mehanizmi predstavleniyao pregradna v celicah. Zbornik srečanja v knjigi: Histo-gematicheskiebarery. - Moskva: Nauka, 1961. - P. 381-394.
11. Hamberg U. Vplivi na sistemu kininskega ki ga proteoliznim inplasma // Proc. Roy. Sol. - London, 1969. - V. 173. - P. 393-406 N 1032.-.
12. Hotchkiss R.D. Mikrokemično Reakcijsko presoljenjem v staimingof polisaharidnih struktur v pripravkih osnovnih yissue // Arch. Biochem. - 1948. - V.16. - P. 131-141.
13. Kaplow L. histokemične postopek za lokalizacijo je alkalna phasphatase aktivnost evacuatingleucocyte v madeži krvnega mozga // krvi. - 1955. - V.10. - P. 1023-1029.
14. Klashka F. Ustna enzimes - nov pristop k cfncer tritment // forum. - Med. - Verl. - Ges. - 1996. -V.2.- R. 102.
15. Quglino D., Hayhol F. Aceton posnetek za cytochemicaldemonstration od dehidrogenase v krvi in ​​kostnega mozga ctlls // Nature.- 1960. -V.1.- str 85-86.
16. Sokolova A. Behandlung des multiplen myeloms mit enzimen // Wzarba Y., Klein M.-W., Miehlke sod. (Eds.). Sistemischeenzymtherapie. Aktueller stati in Fortschritte. - MMW MedizinVerlag. - Munchen. - Nemčija. - 1996.