Non-izotopske metode imuno hormonov

To je bila prva metoda za natančno kvantitativno določitev hormonov, se pogosto uporablja in je imela pomembno vlogo pri laboratorijski diagnostiki endokrinih motenj. Temelji na sodobnih načelih oblikovane RIA imunološki hormonov. Vendar pa je v zadnjih dvajsetih letih, RIA je bila skoraj v celoti izloči iz klinične prakse, ki niso izotopskih metod imuno - ELISA in analize immunohemilyuminestsentnym. Osnova teh metod, kot tudi v RIA temelji na interakciji antigenov in protiteles, ki pa se uporablja kot oznaka ne-radioaktivnih izotopov in encimov, ki katalizirajo reakcijo, da dobimo obarvan produkt, ali svetlečo snovjo. V prvem primeru je končna faza analizo optično gostoto reakcijske zmesi v drugem - število fotonov s luminiscentnih snovi sproščajo.

Video: Regionalna laboratorijske in diagnostični center imunokemijska metode raziskovalnega IHMI

vezan imunski test

Za kvantitativno določitev hormonov najpogosteje uporablja trdna faza ELISA z obema protitelesa. To se izvaja v več vdolbinami plastičnih plošč. Na dnu vrtin sorbirana monoklonska protitelesa, specifična za določeno antigensko determinanto hormona. Vdolbine serumov vzorcev z neznanimi koncentracijami hormona ali standardnih vzorcev z znano koncentracijo hormona. Ploščo smo inkubirali 30-120 min-tega časa, hormonsko molekule uspe povezati s protitelesi adsorbira na plastiko. Po inkubaciji smo vdolbinice sprali s pufrom, da odstranimo nevezan hormon in drugih serumskih komponent. Nato jamice izdelavo poliklonska protitelesa proti hormonu konjugiran na peroksidazo (tako imenovani konjugat) in ploščo inkubiramo 15-30 min. Kjer molekula konjugat veže hormona molekule. Vdolbine enkrat izperemo, da odstranimo nevezan konjugat in dodamo k njihovi raztopino, ki vsebuje brezbarvno peroksidaze substrat. Peroksidazo pretvori podlage v obarvanega produkta. Intenzivnost obarvanja raztopin v vdolbinah (je bila izmerjena v fotometrom) je direktno proporcionalna količini konjugata v vrtini, in je - koncentracija hormona. Koncentracija hormona v serumskih vzorcih izračunamo iz umeritvene krivulje, pripravljene iz meritev koncentracij hormonov standardnih vzorcev.

Poudariti je treba, da za razliko od zgoraj opisanih metod RIA, je ta metoda ELISA nekonkurenčni. Dejstvo, da v reakcijski zmesi v odsotnosti označeno antigen in stopnjo vezave poliklonskih protiteles (konjugiranih) z antigenom, adsorbirane na monoklonskih protiteles je odvisna od koncentracije antigena v vzorcu. Nekonkurenčni metode uporablja, in če analiza immunohemilyuminestsentnom.

Immunohemilyuminestsentny analiza

Obstaja veliko možnosti immunohemilyuminestsentnogo analize. Bomo opisali vzorne izvedbe, ki se uporablja za merjenje ravni gonadotropinov v sodobni avtoanalizerju. Pri tej izvedbi je hormon uporabljeno za medsebojno povezovanje paramagnetne mikrodelce obložimo z monoklonskim protitelesom zelo specifičen za dani hormona. Mikrodelci suspendiramo v raztopini pufra ter dodamo k suspenziji vzorcih seruma ali standardnih vzorcev. Po kratki inkubaciji (10- 20 min) je mikrodelci z vezanim hormonom obori v magnetnem polju in večkrat izperemo. Nato so mikrodelci resuspendirali v pufru in dodamo k suspenziji poliklonskih protiteles na hormona vezan na alkalno fosfatazo. Po spiranju nevezan konjugata dodamo k suspenziji mikrodelcev dioksetina fosfata. Pod vplivom alkalna fosfataza fosfataze dioksetina tvorjen dioksetin oddaja luminiscence žarke. Intenzivnost luminiscence, ki se meri na fotopomnoževalko, je neposredno sorazmeren s koncentracijo hormona v vzorcu.

Video: Laboratorijske študije

Metode za detekcijo avtoprotiteles

Reproduktivni motnje je mogoče z avtoimunske patologije neposredno ali posredno povzroča. Na primer, moške neplodnosti jih avtoimunske odziva proti sperme povzročil, in v patogenezo ženske neplodnosti lahko igra vlogo avtoimunske bolezni ščitnice ali nadledvične žleze. Označevalci avtoimunske patologije so avtoprotitelesa. Za odkrivanje serumskih protiteles (npr antifosfolipidna protitelesa, protitelesa za yodidperoksidaze ali 21-hidroksilaze) uporabimo ELISA metodo analize immunohemilyuminestsentny in indirektno imunofluorescenco. V slednjem primeru, kot antigenski podlago z kriostat dele tkiva, zoper katero je avtoimunska reakcija. Za detekcijo sperme protiteles s semenom in cervikalni sluzi metodo mikroaglutinacijo uporabljenih pri delcev lateksa, prekritega s protitelesi proti IgA ali IgG.

druge metode

Pri nekaterih hormonov, kot so kateholaminov in serotonina, ni enostavno vzpostaviti zanesljive metode imunskim testom. Dejstvo, da so ti materiali zelo nizko molekulsko maso in proti njim je težko dobiti zelo specifične primarne protitelesa monoklonska celo. Podobne pojavijo težave pri razvijanju metod za imunokemijsko testu steroidnih hormonov in njihovih derivatov (zaradi visoke verjetnosti navzkrižne reakcije z različnimi primarna protitelesa steroidov imajo odlično antigensko podobnosti). Zato je za natančno kvantitativno analizo teh sredstev v zadnjih letih vedno uporabimo tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti, ki ji sledi masno spektrometrijo.

Pogosto, endokrine motnje, vključno reproduktivne motnje, se ne patoloških sprememb v ravni gonadotropin in spolnih hormonov in njihovih receptorjev mutacije povzročil. Za oceno receptorske funkcije prej uporabljene biološke teste in vitro: bolnik je biopsija tkiva, ki je tarča hormona, so biopsije objavljen v gojišče dodamo k mediju in ovrednotena hormonsko odziv tkiva tega hormona. mutacije Danes receptorja z določanjem zaporedja DNA nukleotidov v ustreznih genov zaznana. DNA za take teste so običajno pripravljeni iz limfocitov pacientov.