Diagnoza steroidnih hormonov. metode

Video: Sodobne metode diagnosticiranje in zdravljenje bolezni jeter

Za natančno merjenje majhnih koncentracije steroidnih hormonov in njihove metabolite metoda imunološki preskus z uporabo kompetitivne inhibicije imunoprecipitacije, ali radioimunski (RIA), ki ga je Berson in Yalow prvič opisani leta 1960 .. Vendar pa je nadaljnji razvoj te tehnike znanstvenikov se soočajo z nekaterimi težavami. Prvič, steroidi, ne-imunogena, in imajo podobno strukturo - ciklopentan-hapten jedro s rahle variacije, ki otežuje produkcijo specifičnih protiteles.

steroidi To se lahko izvede imunogeni, da se jim pridruži hapten nosilni protein, in nivoji protiteles lahko poveča izvršena predhodna imunizacija haptenov. Vendar steroid odsek, na katerega je konjugiran protein pomemben vpliv na specifičnost protiteles, proizvedenih. Tako protitelesa, ki nastanejo med serumski albumin govejega konjugacija pri položaju 19 kažeta večjo specifičnost v primerjavi z določbami 3 ali 17. Za natančnejšo razlago klinično potrebno imeti podatke o navzkrižne reaktivnosti vsakega izbranega za to analizo protitelesa.
najbolj podjetja - proizvajalci reagentov zagotavlja podatke o svojem navzkrižne reaktivnosti protiteles, ki pa niso vedno zanesljive in je treba navzkrižno preveriti, da je laboratorij, ki bo opravil analizo.

Drugič, vezavo z visoko afiniteto proteini, najdemo v serumu, kot SHBG, tekmujejo s protitelesi in s tem ustvariti hrup za določanje števila molekul steroida z RIA. To vodi do težav za neposredne meritve in zahteva predhodno ekstrakcijo steroida z organskimi topili in pogosto kromatografske separacije. Istočasno, nekatere kemikalije, kot na primer 8-anilinonaftalensulfonat, sposobna inhibiranja vezave steroidne proteine, ki omogoča merjenje koncentracije steroida neposredno brez predhodnega ekstrakcijo.

Video: Sodobne neškodljive metode diagnosticiranja slinavke in hrbtenice ortopedicheskoym center "Julianna"

Neposredna analiza To traja nekaj časa in se lahko avtomatizirajo. V komercialno dostopnih avtomatiziranih naprav za določanje koncentracije estradiola, progesterona in testosterona, ki se uporabljajo v številnih laboratorijih. Takšne analize, pa so značilna nizka občutljivost, in za določanje minimalne koncentracije - nizka zanesljivost. V zvezi s tem se ne priporoča za uporabo pri določanju zelo majhne koncentracije hormonov, kot je estradiol pri otrocih in moških (<100 пг/мл), тестостерона у детей и женщин (<1,5 нг/мл) [64] и прогестерона во время стимуляции яичников (<1 нг/ мл).

problem mogoče rešiti z ekstrakcijo seruma heksana (volumsko razmerje 3: 2), ki mu sledi sušenje in znižanje serumskega bessteroidnoy, ki ga nato podvržemo analizo na avtomatsko napravo.

aplikacija plinska kromatografija v kombinaciji z masno spektrometrijo (GC / MS) premaga številne pomanjkljivosti imunotestom in velja bolj zanesljivo in natančno metodo. Vendar pa je GC / MS izvedemo v več stopnjah, vključno s solventno ekstrakcijo, kromatografskega ločevanja in kemijske razlage so pred analiziranja in občutljivost GC / MS je pogosto manjša kot pri nekaterih vrstah imunotestom. V zadnjem času je ta tehnika premakne s tekočinsko kromatografijo sklopljeno z masno spektrometrijo tandemski (LC / TMS), označen z višjo občutljivost in učinkovitost v primerjavi z GC / MS.

Zdaj, ta nova tehnologija šteje za merilo. LC / TMS je bila uporabljena za hkratno merjenje ravni estradiola in estron in človeške krvne plazme brez crossreactivity. Te tehnike se lahko priporoča kot referenca in se uporablja za standardizacijo in odobritev imunološki študij, ki zagotavljajo potrebne klinične potrebe po preprostosti in visoko prepustnostjo.