Polarizacija metode fluorescenca protiteles. korelacija imunoglobulina

Odgovoriti na vprašanje o obstoju neodvisne vrtenja podenote imunoglobulinov veliko pomoč je bila metoda fluorescenčno polarizacijo. Osnovni pristop, ki je bil uporabljen v teh poskusih za študij imunoglobulinov fleksibilnosti obsegala primerjavo eksperimentalno določeno časovno korelacijo imunoglobulina molekul, ki se nahajajo v poskusu značilen za časovni molekulo ravnine polarizirane svetlobe, s časom korelacije, izračunane ob predpostavki, da je togost molekule.

Torej, če predpostavimo, da je molekula IgG toga elipsoid vrtenje osi z razmerjem 1: 2 in molekulsko maso 150.000, mora biti čas korelacija molekule enaka 73 SKJV in eksperimentalno ugotoviti, da je na splošno precej nižja: 20-40 SKJV. To kaže sposobnost fragmentov neodvisnemu relativnega gibanja in s tem tudi gibek povezovalni odseki polipeptidnih verig. Podobne podatke smo pridobili s spin nalepk.

Stayer in Griffith (Stryer, Griffith, 1965) za določanje časa korelacijo-spin označeni hapten veže na protitelo, preučevali obnašanje snovi, ki vsebuje oboje, fluorokromom skupino, nalepko spin ter različne viskoznosti raztopine.

S spreminjanjem viskoznosti raztopino z dodatkom glicerola, dosežen njen EPR spektra ujema s spektrom-spin označeni hapten veže na aktivno mesto. Nato je metoda fluorescentne polarizacije določi čas korelacije. Tako je dalo čas korelacijo skupina N-O povezano-spinski označenih hapten bilo ugotovljeno, da je 12 SKJV. Avtorji pravilno Upoštevajte, da se lahko ta vrednost prenizka v primerjavi s časom korelacija Fab fragmenta, ker ne moremo izključiti možnosti vrtenja obroča glede imminoksilyyugo dinitrofenilno, togo povezan z aktivno sredini. To pomanjkljivost je skupna vsem poskuša določiti čas primerjalno z IgG Fab fragmenta uporabo-spin označeni hapten.

">

Hsia in Piette (Hsia, Piette, 1969) za določanje časa korelacijo povezano z aktivnim središča-spin označeno hapten, kalibrirnega odvisnosti od viskoznosti EPR spektrov raztopine spin etiket. Čas korelacija ustreza določenem območju, ki ga Stokes 'zakonom - Einstein, ob upoštevanju, da je učinkovita Stokes polmer znamke 5 A. Najkrajši spin-označenih hapten najbolj tesno vezan na aktivno mesto, je imel čas korelacija 39 SKJV.

Dweck et al (Dwek npr. a., 1975a) izračuna korelacijski čas-spin označeni DNP lokaliziran v aktivni centrih IgA (MOPC 315) in Fab- in FV-fragmsntov. Ugotovljeno je bilo, da je 44,4, 23 in 6,5 SKJV oz.

pridobljeni kunec protitelesa neposredno pred spin etikete 2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-amino (N-dichlorotriazine) z imunizacijo oskrbuje z hapten. Rezultat oblikovanju posebnih kompleksov protitelesa in želodčne fragmentov papannovyh s ima spin nalepko svojo močno imobilizacije. Mešanje ustrezne količine raztopin nespecifične zajec IgG in etikete podobni pogoji za posledico le v videzu EPR spektra brezplačno nalepko. Čas korelacija nalepke Izračunane jih Shimshiku in McConnel (Shimshick, McConnell, 1972). je bilo ugotovljeno, da je 32, 30 in 18 SKJV oziroma za kompleksov spin nalepko s protitelesom, Fc- in FAB-delcev v izoelektrične točke (pH 6,3).
Dobljene časovne vrednosti korelacija IgG FAB-fragmentov in potrjen v citiranem dokumentu.

Razlike v času korelacija, dobljen za Fab-fratmenta kot izoliramo in je del F (ab) 2 in intaktno protitelo kažejo omejitev prostega vrtenja FAB-fragmentov, podenot, uvedene z reakcijo F (ab) 2 in IgG. Povečevanje temperature povzročila zmanjšanje zmanjšana na standardne pogoje (3 * 105 P / ° C), čas korelacija nalepk komplekse z F (ab) 2 in IgG.

Očitno, pri segrevanju svoboda Relativno jih premika podenota poveča. Možnost pridobitve protiteles na etiketi, spin, s cepljenjem postregli z hapten je potrjena v drugi študiji (Humphries, McConnell, 1976).