Hibridizacijo mRNA in DNA protiteles. Lokalizacija v- in genov v genomu imunoglobulinov

V poskusih na hibridizacija različna mRNA in DNA, zlasti zgodnje običajno dosežemo dvofaznega krivuljo s prehodno cono v enem območju in drugem nizka - pri visokih vrednostih Cot4l.

Uporablja se za zatiranje hibridizacija neoznačeni mRNA, kodiranje L-veriga homolognih ali heterolognih C-regij že lahko oblikuje, da visoke vrednosti zaradi hibridizacije gena Cotih C in da se število teh genov ne presega dveh - štiri na haploidnega genoma. Prisotnost na terenu z nizkimi vrednostmi Coth raziskovalce delov šteti kot dokaz o velikem številu "germinalnih» V-genov. Vendar pa povečanje čistosti priprav mRNA in uporabo mRNA fragmentov, ki vsebuje in poliA zaporedje je pokazala, da so V-geni tudi edinstvena in da so predstavljeni v genomu, v znesku, ki ne presega dva ali tri izvode v zadnjih letih.

Razmislite podatkov primere hibridizacije poskusi na mRNA, ki kodira sintezo lambda L-verigo mišjega mieloma MOPC 104E z DNA iz jeter myshn (Matthyssens e. a., 1976). Na osnovi podatkov o primarni strukturi klinaste regijah vse so raziskovali lambda verigo miši (18 vzorcev), razdeljenih v sedem podskupin. Če za vsako V območja je posebno V-gen, je treba odkriti 7 klinastega genov v genomu miške. Dejansko njihovo število ne sme biti manjša od 145 (pri teh pogojih se verjetnost odkrivanje sedem različnih podskupin v študiji skupno 18 vzorcev se poveča na 90% - na 50% verjetnosti številom V-gena mora biti najmanj 25). hibridizacija določimo iz krivulje, da se klinasti gen za L-verige MOPC 104E ponavljajo v genomu ne več kot 2-3 krat. Hkrati je stopnja homologije dveh mRNA, ki kodira za sintezo dveh lambda verig, tudi spada v dveh različnih podskupin (MOPC 104E in Nors 2020), zelo velika. Z ekstrapolacijo teh podatkov s preostalim delom mRNA, ki kodira z lambda veriga, je mogoče sklepati, da bi s tem podobnosti klinastih domenah teh verig ima L-mRNA MOPC 104E gnbridizovatsya z vsemi od njih in zato so vrednosti Zibelka bi morala biti bistveno nižja kot je definirano v eksperiment (več ponovitev, manjša je vrednost Zibelka ,,,). Ti podatki kažejo, torej pred prisotnostjo v genomu številnih V-genov, in zato v korist somatske mutacije kot primarni faktor, ki zagotavlja različne protiteles (imunoglobulinov).

Treba pa je opozoriti, da metoda hibridizacija To je precej zapleten in, očitno, ne omogoča, da jasno interpretirati rezultate. Tako je za razliko od poskusov, opisanih zgoraj, z uporabo cDNA, da N- in C-domene v ločeno (cDNA in kDPKs) je bilo hibridizacijo kDNKu visoko specifičnost za mRNA (Smith, leta 1977 Stavnezer, Bishop, 1977). Ugotovljeno je bilo, da medtem ko kDNKs enako hibridizira z vsemi mRNA, ki kodira vrsto kapa L-verigo kDNKu reagira samo z kappa homologno mRNA. To kaže, da je mogoče podcenjevati število V-genov je določena s hibridizacijo.

Ob istem času, metoda hibridizacija Izkazalo se je zelo uporaben za proučevanje lokalizacijo V- in C-genov v celičnem genomu. Nedavno je bila ta metoda sposobna dokazati somatsko preureditev genov, ki kodirajo N- in C-regijo imunoglobulina. Izkazalo se je, da v zarodkov miši genomu V- in C-gsny ločimo, medtem ko je v tumorju (plazma nit MOPC 321, Nors 2020), ki se nahajajo v bližini (kondenziran).

krivulje mRNA hibridiziranja z DNA, izvira iz jetrnih celic in mielom, so skoraj identična. To pomeni, da je v celicah, ki proizvajajo imunoglobulinov ne pomnoževanje genov, ki kodirajo njih.

Tako je v tem trenutku najdenih, genom, ki ima 2 ali 3 gena, ki kodira V-regije lambda verig, 2 ali 3 gena, ki kodira V-regije kapa verige, in 2-4 gena, ki kodira regijo C L-verige.

prvič, da je Spojina N- in C-geni, potem ta kos DNA plus 200-450 neprevedene nukleotidov prevedejo v mRNA, ki po vstopu na koncu 200 3`-poliA nukleotidna premestiti v citoplazmo in je vključena v polyribosomes, ki kodira sintezo prekurzorjev polipeptidnih verig imunoglobulinov.

Po cepitvi prekurzorja ekstrapeptidov (In morda prej) začne sestavljanje imunoglobulinskih molekul, ki jih prenese v mikrosomskimi veziklov in bodisi sekrecije ali vdelavo v celično membrano.