Geni sintezni protitelesa. Število genov, ki sodelujejo pri sintezi imunoglobulinov

primarna raziskava Struktura in genetika imunoglobulinov To je privedlo do sklepa, da je vsak nolipeptidnaya veriga, kodiranega z najmanj dvema genov: V-genov, odgovornih za variabilne regije in C-gepami odgovorne za konstantne regije molekul. Število obeh genov v genom celic, je bistvenega pomena. Dejstvo, da je opazovana raznolikost protiteles različnih avtorjev pojasnil, bodisi v smislu "kalčkov" teorijo genov, po kateri v genomu niza genov za vse znane V-domene za, tj. E. več tisoč V-gena, bodisi z vidika teorije somatske mutacije pri čemer je niz v-genov v genom omejena, in različnih struktur imunoglobulinov (protiteles) pojavlja kot posledica somatske mutacije. Obstaja tudi kompromis vidika. Vse te ideje izčrpno razpravljali, da postane vodilna in soavtorji (Leder e. A., 1974), tako da je bolj podrobno jih ne bomo ustavili.

Upoštevajte, da je bil vložen AE Gurvitch in R. S. Nezlin (1965) prvotna predpostavka da so posamezni odseki genom kodira protitelesa in aktivnih centrov in da L-II- in DITS "zbrati" manjših, neodvisno sintetizirane verige. To je zelo zanimivo, da po petih letih, te ideje ponovno pojavil v obliki hipoteze "izvajanja" ( "vstavljanje") podatke, kodirane z polinukleotidima v majhni (približno 30-45 nukleotidov), ki zagotavlja razpoložljivost CDR v H in L-verig (Wu, Kabat, 1970).

končni Odgovor na ta vprašanja, seveda, lahko zagotovi le neposredno določevanje V- in C-genov v genomu. Izolacija mRNA pripravkov z visoko stopnjo čistosti ustreznega dovoljeno začetnih poskusov. Pristop, ki ga že vrsto let razvita, je za določitev števila genov, ki jih hibridizacije RNA-DNA. Ker je struktura mRNA prepisana strukturo popolnoma komplementarna DNA odsek, potem lahko ta metoda določi število genov in da ugotovi, ali njihovo pomnoževanje pojavi (razmnoževanje) za indukcijo sinteze imunoglobulinov.

Trenutno raziskave Ta vrsta se izvajajo z mRNA, ki kodira sintezo L-verige so dovolj čist pripravam N-mRNA še ni dosežena. Bistven pogoj za izvedbo teh eksperimentov je, prvič, čistost pripravka mRNA in visoko specifično aktivnost in drugič, prisotnost zelo velikim prebitkom DNA. Get vysokomechenye mRNA drog je težko. Običajno je to storjeno z uporabo mRNK izoliramo NT celice gojimo v prisotnosti visokih dozah ali 32P-3H- predshsstvennikov ali večimi - mRNA označeni z 125 J vitro (Farace ea, 1976- Matthyssens SL, 1976 ....). Na voljo je tudi posredna različica metode. Sestoji s tem, da najprej z reverzne transkriptaze na mRNA pripravimo matriko vysokomechenuyu komplementarna DNA (cDNA), in se že uporablja za hibridizacijo na celično DNA (Schechter npr. A., 1976- Storb npr. A., 1976).

Očiščeni mRNA ali cDNA hibridiziramo z nespremenjene določenimi pogoji (ultrazvočno razbijanje) ali DNK iz jeter mišjega mieloma NO celic in odstotek vezanega RNA (ali cDNA) kot funkcija časa za hibridizacijo. (Določitev temelji na stabilnost hibridih RNaze učinkom.) Pod temi pogoji je odstotek hibridizirane RNA (cDNA) (f) je odvisna od koncentracije RNA (cDNA) (RO), koncentracija DNK (C) in inkubacijskih časih (f). Z zelo velik prebitek DNA ni odvisna od f R0, in je odvisen le od C "in t (posteljnega vložka). Količina Zibelka, po kateri hibridizacija je 50%, je očitno odvisna od stopnje dopolnjevanja DNA in mRNA (cDNA).

stopnja homologijo dveh mRNA (In s tem njihove N- ali S-gen), je določena v kompetitivno inhibicijo poskusih hibridizacijo označeni pripravo mRNA neoznačene drog homologni in heterologni mRNA, ali s izoliranje DNA iz tvorjen hibrid in njegova hibridizacija z drugimi označeno homologne in heterologne mRNA. Primerjava teh rezultatov s podatki o primarne strukture teh polipeptidov, ki so kodirani z mRNA preučenih, je mogoče ugotoviti, ali krivulja s frekvenco ponavljanja hibridizacije genov definirani ocenjeni iz podatkov o homologije V- in C-domene.