Prevod mRNA. Značilnosti mRNA prevajanja pod sintezo protiteles

biološke aktivnosti mRNA izoliramo pripravki

Za prevod mRNA Sistemi celic brez uporabljati tri vrste Krebs ascitesa hepatomom (Swan ea, 1972- Schechter, 1973 ..). kunec retikulocitov (Stavnezer Huang, 1971- Mach npr. a., leta 1973 Cowan npr. a., 1976) in pšenica sadike (Schechter, Burstein, 1976- Storb Marvin, 1976). Najbolj priročen, očitno, je zadnji sistem. Dobitek označene prekurzorja v njem je 0,1 pmol ali 2,6 ng do 0,007 enot uvedenih A2vo mRNA (Schechter, Burstein, 1976).

Ker v tej fazi izziv opisano raziskave je preučiti morebitno premočrtno sposobnost mRNA, in sistem za rastlinsko in živalsko celico brez načeloma obnašajo v tem pogledu enako (Schechter, Burstein, 1976), stopnjo primernosti in prednosti sistema seveda odvisna od naslednjih treh parametrov: velikost endogenega proteina sinteza (nižji je boljša), dostopnost in enostavnost potrebnih sestavin in količine mRNA, ki mora biti v sistemu za pridobitev zanesljive raziskovali fuzijski protein.

Video: Broadcast postopek za plastično izmenjavo

analog sistem brez celic včasih služijo kot žaba jajčnih celic. Izkazalo se je (Smith npr. A., 1973), da vnos v oocitov mRNA, ki kodira imunoglobulinskih verig., Vodi do sinteze teh verig. Ta metoda pa je bolj zapleteno in zahteva velike količine mRNA.

Video: Predavanje 3. transkripcija, translacija

Večina poskusov prenaša z oddajo z mRNA, ki kodira sintezo L-verigo (L-mRNA), ker je njihov ločevanje veliko lažje kot izolacijo mRNA, ki kodira za sintezo H-verige (H-mRNA). Učni prevajanja produkti mRNA, ki kodirajo mielomom imunoglobuline L-veriga je povzročilo nepričakovan rezultat. Ugotovljeno je bilo, da mRNA v sistemih brezcelični kodirajo polipeptide sintezo (prekurzorski) po velikosti večja od zrelega L-verige. Oblikovanje prvega težkega proizvoda pod vplivom 41 celic 13S mRNA plasmacytomas MOPC opisanih Swannov sod (Swan SL, 1972.), Pod vplivom 10-14S mRNA iz celic plasmacytomas MOPC 21 -. Milstein et al (Milstein in f. 1972). Molekulska masa dobljenega produkta je večja od molekulske mase posameznih L-verige (1500), iz katere je bilo ugotovljeno, da vsebuje 15 amino kislinskih ostankov.

kot ko dodamo k prosti celičnem sistemu 355-formil-tRNA kot edini vir označi 355-metionil odkriti v težkih komponente, je bilo ugotovljeno, da je vsaj del teh dodatnih aminokislin, ki se nahajajo na NH2-koitse molekulo L-verigo (v evkariontih sinteza polipeptidnih verig se začne z metioninom vključitev) . Kasneje sinteza podatki prekurzor so potrdili poskusi z mRNA "Sinteza kodiranje XL-verige MOPC 70E (Toncgawa, Baldi, 1973), MPC" (Storb Marvin, 1976), MOPC 41 (Mach ea, 1973), MOPC 321 ( Schechter, Burstein, 1976), MOPC 63 (Schechter npr. a., 1976) in L-verige MOPC 104E (Burstein npr. a., 1976).