Metode za izolacijo polyribosomes. Dimenzije polyribosomes sintetizira protitelesa

Trenutno izpostaviti polyribosomes iz limfnem tkivu in mielomske tumorji običajno uporabljajo svoje homogenizacijo v Tris puferne raztopine (pH 7,0-7,6), ki vsebujejo saharozo, KCl (ali manj - NaCl), MgCl2 (ali magnezijev acetat) in katero koli izmed inhibitorja RNaze (pogosteje - heparin). Predpogoj je uporaba reagentov, ki ne vsebujejo RNaze. Najprej odstrani iz homogenata jedra in mitohondrijev postmitochondrial Supernatant smo dodali kateremkoli od detergenta (natrijev deoksiholat ali Triton X-100) smo raztopili enodoplazmaticheskogo retikulum membrano in oborimo polirobosomy (ali frakcionirano) v stopnji (0,5-1,5 M) ali linearno (običajno 15-30% -na raztopina) saharoze gradienti. Dobitek poliribosomnogo material je v tem primeru 30-50% vseh celičnih ribosomov.

Stopnja rojstva polyribosomes, iz različnih virov vplivajo na koncentracijo saharoze, ionsko jakost in pH razmerja pufrske raztopine uporabimo K / Mg in narave detergenta. Tako je za polyribosomes od vranici bolje uporabiti Triton X-100, kot je v prisotnosti natrijev deoksiholat je znan po svojih razgradnje. V nekaterih primerih je priporočljivo tudi dodatkom majhnih količin SaS12 ali spermidina povečujejo stabilnost jedrih celic (Goryunova sod., 1974- Stenska npr. A., 1977) in 2-merkaptoetanol (Schechter, 1973). Da bi zmanjšali čas polyribosomes iz celičnega lizata kontaktne mogoče namestiti tudi direktno na celice, ki vsebujejo pralno sredstvo inhibitor lepljenih neposredno saharoze gradientu. V tem primeru se med centrifugiranjem kletkp istočasno lizirali in frakcionirali (Davis npr. A., 1969).

Opozoriti je treba, da izolacijo materni polyribosomes Celice iz limfnih tkivih normalne ali imuniziranih živalskem tkivu je veliko bolj zapleten in manj razviti postopek kot njihovo ločitvijo od plasmacytomas. Morda je to posledica dejstva, da je plazmacitom endogeni inhibitor RNase, medtem ko je v vranici in bezgavkah, da je ni, in RNaze dejavnost imunizacijo celo povečuje.

znaten vloga, očitno ima neke vrste živali. Najugodnejše predmeti, podatki vrstica so vranica in bezgavke podgan, od katerih je mogoče pridobiti izvirne polyribosomes, usedlega na 250-350S in 160-190S obsega aktivno utrip in oznako aminokislinsko sekvenco (Vassalli, 1967- Vasil s sod., 1969). Obstajajo tudi poročila o dodeljevanju avtohtonih polyribosomes iz vranice zajcev (Becker, Rich, 1966- Scharff, Uhr, 1965) in morskih prašičkih (Nikolaeva, 1976). Ker so tumorske tkiva najbogatejši vir polyribosomes mielomy- limfomov v manjše število teh organelov (Sherr, Uhr, 1971a).

Kot rezultat, izboljšave metoda ločevanja limfatičnega tkiva živali celice in murine plasmacytomas uspeli izolirati najrazličnejše polyribosomes z sedimentacijskih konstant od 118s do 350s. Izkazalo se je, da imunizacija znesek polyribosomes in pol do dva krat poveča (Moav, Harris, 1970- YUrin, 1971), in njihova specifična razporeditev postane dvofazno narave. Podobne podatke o mieloma celice smo dobili s Schubert (Schubert, 1968) in kontakt (Sidorov in sod., 1973).

Predlagano je bilo, da je dvofazna distribucija polyribosomes, označene z gojenjem polipeptidnih verig pokazale prisotnost dveh razredov polyribosomes sodelujejo pri sintezi H- in L-verige. Imunoprecipitacije poskusi z polyribosomes antiserumi za H- in L-verige je dejansko pokazale, da je H-veriga odkriti le na polyribosomes 270-300S in L-veriga - prednostno na polyribosomes 180-190S (Shapiro ea, 1966a- Askonas, Williamson, 1967b ). V skladu z izračuni opravijo avtorji, morajo taki polyribosomes vsebujejo mRNA, ki sestoji iz približno 1250 in 500 nukleotidov, npr. E. zelo primerna za kodira sintezo H- in L-verige.

dobljeni podatki sta bistveno pomembni sklepi, in sicer: 1) sinteza imunoglobulinov je monotsistronnyi narava in 2) velikost polyribosomes in mRNA, ki sodelujejo pri nastanku H- in L-verige, zadostujejo za kodiranje sintezo vsakega od njih kot celote.