Imunoglobulin reaktivnost. Metoda-spin označene haptenov

Hsia in Mali (Hsia, Mali, 1973) raziskovali interakcije dva-spin označene hapteni - DNP hidrazon Derivat N-1-oksi 2,2,5,5-tetrametil-3-pirolidinon (I) in M-1- (oksi-2,2,5,5-tetrametil-3-meti) 2- 4-dinitrobenzen (II) z dvema mislomnymi IgA - MOPC 315 in 460 kot metodo EPR in zmanjšati kvantni izkoristek fluorescence proteina.

Je ugotovila, da jo vezavo hapteni I in II proteina MOPC 315 N-O-skupino, v obeh primerih so močno imobiliziran pogoj, vendar so opazili dve vrsti imobiliziranega komponente v ESR spektra spojine II v nasprotju območju od spojin I. Ko veže na proteinsko MOPC 460 prostega vrtenja N-O skupini spojine tudi zelo omejena, medtem ko ima na skupino spojine vrtenje-N-O II veže na ta protein majhen učinek.

Vendar pa, sodeč po blizu zmanjšanje kvantni dobitkom fluorescence ob protein, ki veže-spin označeni haptenov in termodinamiko proučevanje tega procesa, afiniteta sta spojini I in II proteinov MOPC 315 in 460 nekoliko razlikujejo. Posledično je stopnja imobilizacije N-O skupini-spin označeni hapten niso v vseh primerih označuje moč kompleksa.

Po mnenju avtorjev, razlike v imobilizacija spojini I in II lahko posledica dveh razlogov: 1) ligandi vežejo na različnih lokacijah konformacijsko toga aktivno mesto, 2) konformacijo aktivnega mesta lahko stabiliziran v različnih stopnjah glede na razlike v strukturi ligandov.

v drugi Ugotavljali smo vzroke, ki povzroča nastanek dveh vrst imobiliziranega komponente v ESR spektra kompleksu II proteina MOPC 315. Izkazalo se je, da je zaradi dveh oblikah enantomernymi-spinski označenih hapten II. N-O filter tvorijo ligand z označeno manj hidrofobne mikrookolja, in drugi - bolj hidrofobne, kar v drugačnem položaju imobiliziranega komponente na os jakosti magnetnega polja. Vezni ločene oblike enantomernyh (-spinski označenih amini - DNP) proteina MOPC 315 (kar ima za posledico pojav ene vrste komponento.

Metoda-spin označene haptenov

Nadomeščanje-spin označene haptenov v aktivnih območij protiteles so homologna hapten E uporabljena Leutom in elementi (Leute e. a., 1972), da določimo koncentracijo morfina v preskusni raztopini. Ta metoda učinek močnega povečanja višine EPR linij spektru-spin označeni morfin v svojem prehodu iz imobiliziranega stanja v prosti kot posledica premika aktivne sredini. Višina ozkih linij disinhibited EPR karakteristike spektra v tem primeru koncentracije morfina v testni raztopini.

Spodnja meja občutljivosti tak način-10 7M morfin a (0,03 mg / ml). Poleg tega je ta pristop razvit (Montgomery npr. A., 1975) in je bila uporabljena za določitev koncentracije številnih zdravil v serumu. Izkazalo 100 (krat bolj občutljiva kot konvencionalne kemično metodo in imela visoko specifičnost. Pri posamezni določanje dokaj 50 ul serumu.

Hsia in sodelavci uporablja Kompleksna DNF - metilen (N-1-oksi-2,2,5,5, tetrametil-3-metil-aminopirolidin-2,4-dinitrobenzen) z mieloma IgA (MOPC 315) kot sistem modela za študij navzkrižno reaktivnost proteina glede DFT in njegovi analogi. Na količino prostih, aktivnih centrov razseljenih iz-spin označeni hapten je soditi po intenzivnosti EPR komponent vysokopolyyuy spektra. Kvantitativne ocene, pridobljene s to metodo se dobro ujemajo z rezultati ravnotežno dializo. Predlagana metoda je zelo obetavno v imunoloških raziskavah.
naslednje ugotovitve o strukturi aktivnega mesta protiteles se lahko opravi na podlagi pridobljenih podatkov.