Merila kakovosti immunoassay hormoni

Ali metoda mora biti specifičen, občutljiv, natančen in imajo dobro ponovljivost. Poleg tega je treba razviti metodo analize, tako da je bilo mogoče izmeriti hormona v serumu ter polne krvi in ​​plazme, in včasih v urinu in slini (v primeru, na primer, steroide). Še en pomemben kriterij - minimalno število in največja enostavnost upravljanja, ki jih izvajajo laboratorijsko osebje. Vsi ti kriteriji so bili oblikovani do zadnje podrobnosti, do konca leta 1960. Ker bomo nekaj pripomb in komentarjev.

specifičnost

To je najbolj pomemben kazalnik kakovosti na kakršen koli način imunološki. Specifičnost se lahko določi kot sposobnost metode za odkrivanje samo določen vzorec (analita) snov in ne zazna nobene tuje snovi, celo zelo podobno strukturo z njim. Z drugimi besedami, posebnost - sposobnost metode, da bi minimalno število lažnih alarmov. Specifičnost imunskim testom se določi predvsem specifičnost primarnih protiteles. Prav tako je treba posebej visoko, kadar hormoni poskusi z enakimi ali podobnimi antigenskih determinant. Na primer, adenogipofizarnye hormonov FSH, LH, TSH in hCG sestavljen iz dveh polipeptidnih verig - calamus, kjer so veriga identična. Če analiza po katerem koli od teh hormonov, kot so FSH, kot primarna protitelesa uporabimo nizkospetsifichnuyu poliklonskega antiseruma, večina protitelesa veže na A-verige vseh štirih hormonov, tako da je rezultat merjenja lažno pozitivni. Ta pojav imenujemo navzkrižno reaktivnost. Navzkrižna reaktivnost opazimo pri merjenju prolaktin, ki spada v isti družini z rastnim hormonom in laktogena placente (vsi ti hormoni so zelo podobni sekvenco N-terminalno amino kislino).

Specifičnost poliklonskih primarnih protiteles se lahko poveča za immunoadsorption stolpcu antiserumov z ustreznimi antigeni. Ta pristop je bil pogosto uporablja pred prihodom hibridom tehnologije. Trenutno kot primarno protitelo se skoraj vedno uporablja zelo specifičnih monoklonskih protiteles, ki se vežejo na antigenske determinante edinstvenih do tega hormona.

Specifičnost imunokemičnim analize ni odvisna le od lastnosti primarnega protitelesa, temveč tudi od mnogih drugih, ki so včasih nepredvidljivih dejavnikov. Zlasti lahko specifičnost zmanjša zaradi navzkrižne reakcije s primarnimi protitelesi, neznanega komponento v testnem vzorcu seruma ali plazme. So časi, ko nekaj sprememb mesnatost sirotkinih beljakovin in zaradi tega postane antigensko podobnost z analiziranem hormona. Končno se lahko v serumu komponente uvedene v aktivnih območij primarnega protitelesa in zmanjšanje specifičnost njihove vezave na antigen. Imunološki tehnologija, obstaja več načinov za preprečevanje navzkrižnih reakcij, vendar, nemogoče predvideti vse presenečenj.

Video: Live zdravo! Zdravljenje moške neplodnosti

Večina imunokemijska preskusni sistemi, izdelani za merjenje ravni hormonov v nekaterih človeških telesnih tekočinah (seruma, plazme, urina, sline). Skladno s tem je specifičnost testnih sistemov ustanovljena za te bioloških tekočin. Če uporabimo takšne preskusne naprave za in vitro analizo hormonov, kot je po inkubaciji endokrinih celic v pufru Krebsovo raztopino ali Ringerjeva ali v vsakem gojitvenem mediju, je potrebno preveriti njihovo specifičnost zlasti takšne "nenormalne" pogoji.

občutljivost

Občutljivost imunokemijsko testa lahko definiramo kot najnižjo koncentracijo snovi, ki se lahko meri s to metodo. Za oceno občutljivosti uporabo standardnega vzorca z znano koncentracijo hormona ali drugih antigenov. Ta vzorec smo pripravili s serijskimi razredčenji vzorcih z zmanjšanjem koncentracije hormona. Tako je občutljivost preskusnega sistema je neposredno sorazmerna s stopnjo razredčitve standardnega vzorca, s katerim je mogoče pridobiti natančne rezultate meritev. Občutljivost imunokemijsko testnega sistema je odvisna predvsem od afinitete primarnih protiteles, ki se uporabljajo v njej. Poleg tega je občutljivost odvisna od vrste imunskim testom, na katerih je test sistem namenjen. Na splošno, občutljive preskusni sistemi, ki temeljijo na RIA je višja od testnih sistemov na osnovi analize immunohemilyuminestsentnogo in ELISA.

Video: Kaj je hrana? 5 Merila. Surova hrana, fruktoedenie

Za oceno občutljivosti uporabo standardnega vzorca z znano koncentracijo hormona ali drugih antigenov. Ta vzorec smo pripravili s serijskimi razredčenji vzorcih z zmanjšanjem koncentracije hormona. Tako je občutljivost preskusnega sistema je neposredno sorazmerna s stopnjo razredčitve standardnega vzorca, s katerim je mogoče pridobiti natančne rezultate meritev.

Občutljivost imunokemijskega testni sistem mora biti taka, da se lahko uporablja za merjenje ravni hormonov se je nahajal le v normalnem območju koncentracij, ampak tudi v nadaljevanju tega območja. Zato preskusni sistemi in oblikovalci si prizadevajo za dosego občutljivost med 3. in 5. percentile ali standardov v območju od dveh do treh standardnih odklonov od spodnje meje normale. Na primer, razpon normalnih koncentracij LH pri ženskah je 1,1-77 ie / l (2,3 162 pmol / L). Zato je treba občutljivost testnega sistema za merjenje LH približno 0,4 IU / L (0,84 pmol / L). Ta visoka občutljivost je zlasti pomembno, če je to potrebno za merjenje nizkih koncentracij LH, zlasti za diferencialno diagnozo primarne amenoreje. V tem primeru je raven LH pod 10 IU / L kažejo sekundarne (hipogonadotropni) hipogonadizem, medtem ko višje ravni - po primarni hipogonadizem. Imunokemijska preskusni sistem mora imeti visoko občutljivost in v tistih primerih, ko želite, da ujame tudi najmanjše spremembe v koncentraciji hormonov. Najpogosteje je to problem nastane pri načrtovanju in ocenjevanju učinkovitosti hormonsko nadomestno zdravljenje s. Na primer, pri zdravljenju hipotiroidizem odmerek levotiroksina izberemo meritev TSH. Stopnja Običajno TTG se giblje med 0,4 in 4 mIU / l (2,9-29 pmol / l). medtem ko imajo sodobni preskusne naprave za merjenje TSH občutljivost bolje od 0,01 mU / l (0,073 pmol / l). Ponavljajoče zelo občutljivi meritve TSH omogočajo endokrinolog zelo natančno prilagoditi odmerek levotiroksina.

Občutljivost testnega sistema je odvisna predvsem od afinitete primarnih protiteles, ki se uporabljajo v njej. Nadalje, občutljivost je odvisna od vrste imunskim testom, na katerih se je razvila sistem test (RIA analiza immunohemilyuminestsentny, ELISA). Občutljivost RIA in immunohemilyuminestsentnogo analize na splošno višja od občutljivosti ELISA, kot je v prvih dveh metod imunoloških reakcij poteka v tekoči fazi, pri čemer so antigenske determinante hormonov postala bolj dostopna primarnimi protitelesi. Vendar pa je za raziskovalne namene in se je zelo občutljiv preskusni sistem, ki temelji na ELISA.

natančnost

Ta stopnja bližine merilnega rezultata koncentracije hormona na svoje prave vrednosti. Natančnost je odvisna od občutljivosti in sistematične napake v metodi: večja občutljivost in manjša napaka, večja je natančnost. Točnost imunoloških testnih sistemov je bila ocenjena z merjenjem koncentracije hormonov v standardnih vzorcev.

ponovljivost

Ta sposobnost imunokemijska Testni postopek daje podobne rezultate je mogoče z ponovljenih meritev koncentracije hormona v istem vzorcu pod različnimi pogoji (v različnih časih v različnih laboratorijih). Da bi ocenili ponovljivost smo uporabili kot standardnih vzorcev, dobljenih iz bolnikov in vzorcev. Za dosego visoke reproducibilnosti, mora biti laboratorij tekoče delo s to metodo test sistema in meritve pri standardnih pogojih (pri isti temperaturi, enake trajajo reakcij).

Video: Zavedanje tehnologija - Delo z avtomatskim biokemičnega analizatorja ChemWell-T

Specifičnost, občutljivost in ponovljivost je obvezna, so opisane v navodilih in listov za vse komercialno dostopnih imunokemijska testnih sistemov in imunokemijskega avtoanalizerju. Kljub temu pa mora vsak laboratorij neodvisno oceniti vse te nastavitve, predvsem ponovljivosti, v dejanskih obratovalnih pogojih.