Gen anomalija protrombinski 20.210 g / A

V družinah bolnikov s trombozo zazna avtosomno dominantnega dedovanja F2: 20210 G / A.

V trenutno povezan s tem genetsko anomalijo s prekomernim protrombina. Kljub tehnično sposobnost določanja visokih odmerkov protrombina, odkrivanje te bolezni je treba temelji zgolj na podatkih PCR visoko občutljivost in specifičnost PCR zagotovijo in vitro sintetiziramo oligonukleotide, komplementarne z ustreznim deležem protrombinskega humanega gena.

Princip metode

Za identifikacijo polimorfnih alelov v F2 pomnožitev gena z uporabo ustreznih delov gena s PCR z naknadno detekcije ojačanja izdelkov.

Reagenti in oprema

• Za določitev anomalije F2: 20210 G / A se uporablja naslednje praymerypraymer 1 (naprej primer) - 5`-TGGGAAATATGGCTTCTACA-3` (nukleotide 20035-20054) - primerjem 2 (reverzni primer) - 5`-CACTGGGAGCATTGAAGCT-3` (nukleotidi 20229- 20.211).
• Kontrolni vzorci z alela divjega tipa in mutant tip alelov.
• Termocikler in druga oprema za izvedbo PCR.

Vzorce krvi za študij za raziskovalne material, je lahko katerikoli vir DNK, ampak bolj venske krvi uporabimo, ki bo v epruvete, ki vsebujejo EDTA Vzorce smo shranili pred obravnavo pri temperaturi 2 ... + 8 ° C do 24 ur. Vzorce smo shranili dolgimi lahko zamrznemo pri -40 ..- 70 ° C.

Izolacija DNA iz kliničnih vzorcev materiala se lahko izvede z različnimi metodami, na primer z uporabo naprav na osnovi kremena, določa mikrocentrifugi stolpce sklopov, ki se nanašajo na ekstrakciji fenol-kloroform in drugi.

tehnika uspešnosti

Metoda temelji na motornem regijo DNA kopijo polling uporabo in vitro encima. Napredek pri študiji morajo izpolnjevati izbrano opremo in postopek za analizo PCR (gelsko elektroforezo, flash ali podobno.).

Vrednotenje rezultatov študije

Vrednotenje rezultatov izvedemo na način, ki omogoča, da vizualizacijo oligonukleotid polimorfno zapušča. DNA fragmente smo določili z uporabo različnih fluorescentne barve, ki se specifično vežejo na DNK.

Razlaga rezultatov ankete

Za mnoge prevoznike polimorfizem značilno različno lokalizacijo trombozo, tveganje, ki bistveno poveča v prisotnosti nosečnosti, uporaba peroralnih kontraceptivov, v pooperativnem obdobju, in drugi. Nepopolna penetrantnih gena, v zvezi s tem, nekateri prevozniki niso imeli trombotičnih motenj. V prisotnosti tega polimorfizma varianta homozigotno starosti prvi epizodi je manj, in pogostost in resnost tromboze zgoraj. heterozigotna za odkrivanje frekvenca anomalija, po literaturi, je v populaciji približno 1-2%. V navzočnosti F2: 20210 g / A vrednosti protrombinskega pri bolnikih približno 1,5-2-krat višja od normalne.

Za detekcijo omenjenega anomalija protrombinski gen pri bolnikih s ponavljajočim tromboza utemeljili omogoča daljša antikoagulacijske profilakse. Takšne raziskave bodo pomagale opredeliti nosečnice s povečanim tveganjem za trombozo.

Vzroki napak

• Napake predhodno analitično fazo študije (v nasprotju s pogoji shranjevanja ali neprimernega prevoza biomaterial nukleinskih kislin lahko razgradi, povzroči lažno negativne k rezultatom heparin lahko zavira reakcijo PCR, tako vzorce krvi se ne sme izvesti v epruvete, ki vsebujejo antikoagulant).
• Kontaminacija vzorcev tuje biološki material.
• Kršitev načel coniranje laboratorija za molekularno genetske študije.
• Zavrnitev študija negativno kontrolo.
• Zavrnitev izvesti ponovno analizo pozitivnih vzorcev.
• Neuspeh izolirnimi tehnikami DNA.
• Specifičnost in občutljivost PCR primerji bistvu odvisna od strukture, tako da je uporaba oligonukleotidov različnih proizvajalcev lahko povzročijo različne rezultate.

Druge analitske PCR Technology različnih izvedbah so zanesljive laboratorijskih postopkov lahko izvajajo visoko občutljivost, specifičnost in ponovljivost. Kljub obstoj tehničnih možnosti, da prepoznajo povišane ravni protrombina, je treba diagnozo trombofilije temelji izključno na uporabi različic PCR.