Posredno diagnozo genetske bolezni. Natančnost molekularno diagnostiko možnih virov napak.

Posredno (posredno) pristop k molekularno diagnostiko Zgodovinsko je prej in bolj univerzalna. Temelji na analizi znotraj in vnegennyh polimorfnih mest. Ker slednji običajno štrli kratke DNA-sekvenco enake homolognih kromosomskih regijah, ki se razlikujejo v osnovnem strukturo. Diagnostični polimorfna mesta se lahko nahaja bodisi znotraj samega gena ali v njegovi neposredni bližini.

Nujen pogoj za posredne diagnostiko DNK To je prisotnost v družini bolnega otroka ali priložnost za študij svojo DNK (krvne madeže, histološke priprave, itd). Vzpostavitev informacijske vsebine vključuje identifikacijo polimorfno spletne strani, ki se lahko uporablja kot molekulskega označevalca za diskriminacijo tako mutirane in normalni alel. V primeru avtosomne ​​recesivnih bolezni bodo starši heterozigotna za ta polimorfizem, in bolnika - homozigoti enega alela markerja. To heterozigotnost za molekularno polimorfizmov določa vsebino informacijskega posameznega družinskega visokim tveganjem rojstvu otroka z genetsko boleznijo. Glede na razdelitev označevalcev alelov na homolognih kromosomov bolnika in njegove starše družine se lahko v celoti informativne za diagnostiko DNK delno informativnih ali uninformative.

Bistveno je, da analizira družine z visokim tveganjem je število polimorfna strani enega samega gena, natančno določiti, da kakršne koli posebne alel podedoval mutirani gen, in da družina popolnoma informativni za prihodnje PD.

točka Prednost posredni metodi - Možnost diagnostike DNK, ne da bi natančno identifikacijo mutacij v genu, tudi v odsotnosti točnih podatkov o identifikaciji in kloniranje mutiranega gena. Njegova pomembna pomanjkljivost je nezmožnost za diagnozo v odsotnosti bolnega otroka (ni mogoče natančno določiti, kateri polimorfna alel povezan mutirani gen), je prišlo do napake pri diagnozi zaradi možnosti prečkati med mejozo in izvedbo polimorfno mesto na zdrav alel.

Natančnost molekularno diagnostiko, možne vire napak

Pri opravljanju prenatalna diagnoza z molekularnimi metodami je pomembno imeti v mislih dve glavni viri napak:
- onesnaženje vzorca mater celic fetalnih;
- možnost prehoda čez pri posredni metodi.

Glede na zelo visoko občutljivost metode PCR, je pomembno, da se prepreči onesnaženje vzorcev fetalnih tkivnimi matične celice. Čistost vzorca za analizo BP lahko doseže le s skrbno izbiro placente ali horionskega resic pod binokularni povečevalno steklo, čemur sledi spiranje s fiziološko raztopino. To je še posebej pomembno, da se prepreči mater stik krvi v primeru ploda vzorčenja popkovnične krvi, ki ga cordocentesis. Visoka usposobljenost zdravnika-operaterja in uporaba kvalitativnih reakcij da prepoznajo mater krvi nečistoče bi se izognili temu zapletov. Tveganje teh diagnostičnih napak lahko bistveno bp umenshen pri delu v sterilnih pogojih.

Zanesljivost molekularno diagnostiko Z neposredno metodo, t.j. z opredelitvijo mutacije gena, je zelo visoka in se približuje absolutna. Vendar pa glede na celotno paleto možnih sprememb v genomu v času dozorevanja spolnih celic (crossing-over), in v zgodnjih fazah embriogeneze (mutagenih učinkov), je bolj natančen diagnostični indeks približno 99,9%. Precej težje ovrednotiti rezultate molekularno diagnostiko posredna metoda. V primeru registracije intragenic polimorfizmov je natančnost posredno diagnoza precej visoka, saj je količina vnutritennogo crossover običajno ne več kot 0,1% za večino znanih genov.

Izjema je lahko le relativno velike geni, kot je distrofinskem genu, hemofilija A, nevrofibromatozo in drugi. Tako je v primeru stopnji Napačna distrofinskem lahko do 2%, kar ustreza visokofrekvenčnim križnega vnutritennogo a (približno 2%) v tem Giant gena (2,2 milijona bp). Prav tako je pomembno, da se upošteva stopnjo pacientovih sorodnikov in probands ki preživi AP. Količina morebitno povišanje napak, če je alel dvojno podajo odločena, da ne v sorodstveni sadja, medtem ko se njeni sorodniki. Še posebej je treba skrbno oceniti rezultate posredno diagnoze s pomočjo vnegennyh polimorfne loci. Menijo, da z zaupanjem, da preživijo AP v teh primerih lahko le hkratno testiranje več polimorfnih mestih spremljevalni mutiran gen. Običajno se uporablja za molekularnih diagnostičnih markerjev, frekvenca rekombinacije ki mutantni aleli je manjša od desetin ali stotink odstotka. DNA polimorfizmov karakteristične sekvence začetnih oligonukleotidov za PCR, so posredne metode vrednosti napak za različne bolezni prenatalnim diagnosticiranih povzeti v pregledih in monografij.