Faktor Leiden

Kot smo že omenili, genska nepravilnost koagulacijski faktor V G 1691>A smo odkrili leta 1994 R. Bertina et al. Posamezen nukleotidna substitucija gvanin do adenin pri položaju 1691 (1691 G>A) v eksonu 10 F5 gena povzroči molekulsko okvar koagulacijski faktor V. Ker zamenjava pri legi 506 od molekul proaktselerina arginina z glutaminom (Arg506Gln) moteno njegovo sposobnost za propad, kar rezultira v tvorbi disfunkcijo sistem C antikoagulanta proteina in nagnjenosti k relapsa tromboze. Genetske nepravilnosti koagulacijski faktor V (Leiden) je najpogostejša trombofilnimi napaka v evropski populaciji.

Za detekcijo genetskih nepravilnosti izvedb PCR. Visoka občutljivost in specifičnost PCR zagotovijo in vitro sintetiziramo oligonukleotide, komplementarne za ustrezne regije gena za humani koagulacijski faktor V.

Pomanjkanje enotne nomenklature genetskih okvar povzroča razširjena v sodobni znanstveni literaturi številne znake to anomalijo: F5: 1691 G>A Rs6025, Arg506Gln, G1691A, R506Q, Leiden (leydenovskaya) in drugi.

Princip metode

Za identifikacijo polimorfnih alelov v F5 pomnožitev gena z uporabo ustreznih delov gena s PCR z naknadno določanje ojačanja izdelkov.

Reagenti in oprema

• Kontrolni vzorci z alela divjega tipa in mutant tip alelov.
• Da bi ugotovili nepravilnosti F5 1691 G>Uporabili smo dve primerji. Primer 1 (naprej primer): ACGTTGGATGC TGAAAGGTTACTTCAAGGAC, Primer 2 (reverzni primer): ACGTTGGATGCTCTGGGCTAATAGGACTAC.
• Termocikler in druga oprema za izvedbo PCR.

Vzorce krvi za študij za raziskovalne material, je lahko katerikoli vir DNA, vendar se uporablja več venske krvi, ki bo v epruvete, ki vsebujejo EDTA. Vzorce smo shranili pred obravnavo pri temperaturi 2 ... + 8 ° C do 24 ur. Dolga shranjenih vzorcev lahko samo v zamrznjenem stanju pri -40 ... 70 ° C

Izolacija DNA iz kliničnih vzorcev materiala se lahko izvede z različnimi metodami, na primer z uporabo naprav na osnovi kremena, določa mikrocentrifugi stolpce sklopov, ki se nanašajo na ekstrakciji fenol-kloroform in drugi.

Metode določanja

Metoda temelji na motornem regijo DNA kopijo polling uporabo in vitro encima. Napredek pri študiji morajo izpolnjevati izbrano opremo in postopek za analizo PCR (gelsko elektroforezo, flash ali podobno.).

VIDEO: Netherlands, Noord-Holland. 1. del. 06-2011

Vrednotenje rezultatov študije

Vrednotenje rezultatov se izvaja na način, ki omogoča zamenjavo polimorfna oligonukleotid doma?. PRIMER vizualizacijo rezultatov pomnoževanje, prikazane na sl. 5.1.

Video: vsa mesta in države sveta na enem mestu

Izvedbeni leydenovskoy anomalija rezultati detekcijskih V gena koagulacijskega faktorja naslednje: G / A - heterozigotnih anomalije obliki pri legi 1691- A / A - homozigoti nepravilnost. Populacija prevladuje genotip G / G.

Razlaga rezultatov ankete

Prevoznikov leydenovskoy F5 genske anomalije so nagnjeni k trombozo, kar bistveno povečuje tveganje v nosečnosti, uporaba peroralnih kontraceptivov, v pooperativnem obdobju, in drugi. Gene penetrantnih je nepopolna, zato številni prevozniki nima zgodovino trombotičnih motenj. Pri tej izvedbi je prisotnost homozigotne pogostnosti mutacij in resnosti tromboze zgoraj. heterozigotna za odkrivanje frekvenca anomalija, po literaturi, je v populaciji približno 1-3%.

aminokislinska substitucija pri legi 506 daje mesto cepitve molekule koagulacijskega faktorja V aktivirani protein C, kar bistveno zmanjšuje stopnjo njegove razgradnje. Zato je prisotnost gena nepravilnostmi F5 G 1691>Odpornostjo opazili koagulacijski faktor Va s aktiviranega proteina C.

Dokaz te mutacije pri bolnikih s ponavljajočim trombozo omogoča upraviči daljša antikoagulacijske profilakse. Takšna študija lahko pomaga identificirati posameznike, ki potrebujejo za odločanje o uporabi antikoagulantov pri izvajanju operacije.

Video: Dr. Elena Berezovskaya - trombofilijo in nosečnost

Vzroki napak

• Napake predhodno analitično fazo študije (v nasprotju z čas skladiščenja ali neprimernega prevoza biomaterial nukleinskih kislin lahko razgradi, povzroči lažno negativne k rezultatom heparina je sposoben, da inhibira PCR, tako vzorce krvi ne sme izvesti v epruvete, ki vsebujejo heparin).
• Kontaminacija vzorcev tuje biološki material.
• Kršitev načel coniranje laboratorija za molekularno genetske študije.
• Zavrnitev študija negativno kontrolo.
• Zavrnitev izvesti ponovno analizo pozitivnih vzorcev.
• Neuspeh izolirnimi tehnikami DNA.
• Specifičnost in občutljivost PCR primerji odvisna predvsem od strukture, zato je uporaba primerji različnih proizvajalcev lahko povzroči pridobitev različne rezultate.

Druge analitične tehnike

PCR variante ugotovljeno, da so zanesljivi laboratorijske postopke, ki lahko zagotovijo visoko občutljivost, specifičnost in ponovljivost. V večini primerov trombofilnimi za diagnosticiranje stanja, povezanega z okvaro proaktselerina inaktivacijo lahko po postopku koagulacije določanje odpornosti proti aktiviranega proteina C. opombo pa se uporablja, da se druge motnje (hyperproduction antihemofiličen globulin VA et al.) So prav tako lahko povzroči rezistenco koagulacijski faktor V do aktiviranega proteina C.