Načini laboratorijski diagnostiki. imunološke metode

Video: CMD - Center za molekularno diagnostiko

Imunološke metode imajo pomembno diagnostično in prognostično vrednost v številnih revmatičnih bolezni.

Študija nespecifične imunosti vključuje preiskuje število levkocitov in monocitov v krvnem serumu, dopolnjujejo komponente, mobilnost ocena, fagocitne in Mikrobicidni dejavnosti mononuklearnih fagocitni, proizvodnja vnetnih citokinov (IL-ip, IL-6, TNF-alfa, in drugi.).

Ravni dopolnjujejo povečanje opazi pri akutnem vnetju, nalezljive procesov in zmanjšanje - pod immunocomplex bolezni. Tako zmanjšanje koncentracije C2-Cs, in dopolnjuje komponente v obarjalno reakcijo z antiserumi tipično za SLE, RA, ankilozirajoči spondilitis, vaskulitis, ulceroznega kolitisa. To je posledica aktivacije komplementnega sistema zaradi tvorbe imunskih kompleksov. Določanje diagnostično pomembne komponente komplementa v sklepno tekočino (vsebnost zmanjša RA) v cerebrospinalni tekočini (vsebnost zmanjšuje s lupus tsereb-rovaskulite) v biopsije kože in ledvice.

Stanje celično imunost se oceni s kvantitativnimi kazalniki (absolutni in odstotek T-limfocitov, ki delujejo limfocitov T, T pomagalk tipa I in T-citotoksičnih limfocitov) in funkcionalne teste.

Najpogosteje se uporabljajo:
&diams- Reakcijsko inhibicija migracijo levkocitov (RTML) v prisotnosti antigenov in mitogeni: RTML s phytohemagglutinin (PHA), concanavalin A (Con A), alergeni hemolitični Streptococcus, Staphylococcus. Reakcijsko temelji na lastnino limfocitov z preobčutljivosti na specifične antigene, da se tvori stabilizacijo limfokinov migracijo inhibiranja leykotsitov- višjo funkcionalno aktivnost limfocitov, manjših številk RTML;
&diams- limfocit rezkanjem transformacija Reakcijsko (BTR), ki se ovrednoti z uporabo funkcionalno aktivnost limfocitov T. Kot odgovor na mitogene (PHA), Con A in antilimfocitnih seruma et al. Limfocitov transformacija pojavlja v limfoblasti (večji peskalni celice je oblikovana, večja je aktivnost limfocitov T).
Podpopulacij T-limfocitov, določene z monoklonskimi protitelesi.

Za oceno funkcionalnega stanja humoralno imunost s kvantitativno določitev imunoglobulinov v krvni plazmi. Imunoglobulin (Ig) - so beljakovine, ki imajo funkcijo protiteles in razdeljene v pet glavnih kategorij: IgG, IgA, IgM, IgD, IgE.

IgG prisoten v serumu pri najvišji koncentraciji (6,39-13,49 g / l), da predstavlja 80% aktivnost protiteles. Razlikovati 4 podrazredov IgG: IgG2 (60-70%), IgG2 (20-30%), IgG3 (5-8%) in IgG4 (1-3%).

IgA je glavna izločevalna imunoglobulin najdemo v sline, solz, bronhialne in črevesnih izločkov in mleko. Skrivnosti IgA dimer oblika, ki vsebuje J veriga, en peptid, ki se imenuje sekretorni komponenta. Koncentracija IgA v standardu je 0,7-3,12 g / l.

IgM vsebuje 5 monomernih podenot z disulfidnimi mostički in J-verige povezanih, tvori pentamer. serumska koncentracija IgM običajno znaša 0,86-3,52 g / l.

IgD v sledovih v serumu, ki pa je osnovni tip imunoglobulina prisoten na membrani limfocitov. IgE ima pomembno vlogo pri reakcije takojšnje preobčutljivosti.

Za določitev koncentracije glavnih razredov imunoglobulinov (IgG, IgM, IgA) z uporabo metode radialno imunodifuzije ali nefelometrične tehniko, IgE - zelo občutljiva radioimunski ali encimskim imunotestom tehnike.

Določitev koncentracije imunoglobulinov se uporablja za diagnosticiranje primarnih ali sekundarnih imunsko pomanjkljivostjo (v teh primerih, zmanjšanje koncentracije glavnih razredov imunoglobulinov), in monoklonsko immunoglobulinopaty (v kombinaciji z imunoelektroforezni serumu in urinu).

Najpogostejša oblika imunske pomanjkljivosti je IgA immunodefi-op, katerih razvoj je včasih opaziti pri revmatičnih boleznih, in lahko opravi tudi proti ozadju nekaterih zdravil (D-penicilamin, sulfasalazin, captoprilnih in drugih.). Povečanje koncentracije IgA pogosto opazili pri seronegativnih spondiloartropatij, hemoragični vaskulitis, Sjogrenov sindrom, psoriatični artropatija.

Pogosto se pri vnetnih revmatičnih bolezni opaziti razvoj poliklonalno Hyper.
Revmatoidni faktor (RF) so avtoprotitelesa na Fc fragmenta IgG, čeprav so lahko povezana z IgM in IgA.

Morda blokiranje revmatoidni faktor avtologni IgG, kar vodi do povečanja odstotka skrito, RF kompleksirana (s podaljšanim revmatoidnega artritisa z vistseritami).

Za identifikacijo RF razreda M velja:

&diams- lateks aglutinacijski reakcijsko inertna delce lateksa prevlečena s humanim Ig. Najvišja dajanje redčenje serumske aglutinacije Titer šteje reakcijo. Titer 1:20 ali več, se šteje kot pozitivno;
&diams- Reakcijsko Vaaler Rosa z ovčjih rdečih krvničkah prevlečenih s kunčjega anti-ovčjih rdečih krvnih celic.

Najvišja razredčitev seruma dajanje aglutinacijo diagnostično pomemben, če ne celo manj kot 1:32.
Lupus (LE)-celic. Prisotnost le-celic zaradi prisotnosti v serumu razreda IgG protiteles proti kompleksa DNA-histon, ki reagirajo s jeder sprostijo iz različnih celic zaradi uničenja teh celic. Le-celice so navedene v 60-70% bolnikov s SLE. So zreli nevtrofilci, fagocitozira jedrska snov uničenih celic. V citoplazmi nevtrofilcev dalo velik homogeno vključitev (hematoksilinom krvnimi celicami).

V primeru nepopolnega fagocitozo strani nevtrofilcev nabere tele hematoksilin-oblike vtičnico (rozeta tvorba pojav). Rezultat zazna vsaj LE-5 celicah na 1000 levkocitov je pozitiven. znesek na enoto le-celice najdemo pri 10% bolnikov z revmatoidnim artritisom, kroničnim aktivnim hepatitisom, alergije drog, nodoznega periarteritisa, sistemska skleroderma, dermatomiozitis, obolenja mešanega veznega tkiva.

Protijedrna protitelesa (AHA) najpogosteje definirana v revmatične bolezni in se pojavijo pri več kot 90% bolnikov SZST. So družina avtoprotiteles v stiku z ribonukleinskih kislin in proteinov, ožje, citoplazme antigenov. AHA določi posredno imunofluorescenco, dvojno imunsko in kontrelektroforeza, ELISA in Imunoblot.

Pri uporabi posredne metode imunofluorescentnim v praksi, obstaja šest vrst barvo ali luminiscenco, kali, ki so pomembne za diagnostiko sistemskih bolezni vezivnega tkiva:
&diams- homogeno obarvanja zaradi prisotnosti protiteles proti dvojnoverižni DNA in histones, najznačilnejši SLE in doziranja lupus;
&diams- periferno na obarvanje s krožeča protitelesa za jedrsko membrano (posebej za SLE) povzročajo;
&diams- zrnat obarvanje najpogosteje pride, kar kaže na prisotnost različnih AHA, da ima najnižjo specifičnost (navedeno v SLE, RA z visceralno manifestacij, obolenja mešanega veznega tkiva);
&diams- nucleolar (nucleolar) luminiscenco zaradi sestavin protiteles jedrce pojavi pri SSC, bolezen Shegrena- ANF včasih najdemo v endokrinih bolezni (poliendokrinopatiya, diabetesa tipa I mellitus, tiroiditis, hipertiroidizem), kožnih bolezni (psoriaze, pemfigusa) ter ozadje nosečnosti po presaditvi organov in tkiv (pri razvoju reakcije "presadka proti gostitelju"), pri bolnikih, ki se zdravijo s hemodializo;
&diams- centromerne luminiscenco so opazili pri pojavu protiteles proti centromera kromosomov (značilno kroničnosti MIC);
&diams- citoplazemskega lučka kaže na prisotnost protiteles proti-tRNA-sintetaza, zlasti Jo-1 (skupno v dermatološko in polimiositisom).

Načini radioaktivnih in imunskega vezave, radialni imunsko, imunoprecipitacije pokazala AHA do specifičnih jedrnih antigene.

Protitelesa proti kislino (DNK). Protitelesa proti Naravna (dvojnoverižna) DNA, zlasti tistih, ki so ugotovljene s testi radioimunskim (Pharr metoda) razmeroma specifično za SLE. Njihova opredelitev je ključnega pomena za oceno aktivnosti bolezni, napovedovanje razvoja poslabšanj in učinkovitost terapije. Protitelesa proti denaturira (eno-) DNA manj specifična za SLE in pogosto ugotovljene v drugih revmatičnih bolezni.

Protiteles proti histones. Histones - osnovna sestavina, ki sestoji iz treh podenot: dve dimeri H2A-H2b ki obdajata NS-H4 tetramer in povezan s tretjo podenoti sestavljeno iz dveh ovojev molekule DNA.

Protitelesa proti histones H2A-H2b najdemo v skoraj vseh bolnikih s sindromom lupus drog (inducirana novokainamidom), pri bolnikih, ki so prejemali prokainamid, vendar nimajo simptomov lupus, kot tudi pri 20% bolnikov s SLE.

Protitelesa v ribonucleoprotein (RNP). Protitelesa K ribonucleoprotein ki obsega anti-Sm, anti-snRNP (U1RNP), anti-ro / SS-A, anti-La / SS-B, ki se nahajajo v SLE skupaj več kot protitelesa, dvojnoverižna DNA. koncentracija v krvi teh protiteles je izredno visoka. Najdeno v mešani bolezni vezivnega tkiva, vsaj - pri bolnikih s SLE, ki vodi klinično manifestacijo kožnih lezij, subakutni SSD in drugih avtoimunskih revmatičnih bolezni.

Protitelesa proti Sm (Smith) -antigenu. Protitelesa proti SM-antigen najdemo le v SLE. Uporaba Postopek imunofluorescenca so opredeljene v 30% primerov in 20% - po metodi hemaglutinacije. Protitelesa proti SM-antigen ne odkrije v drugih revmatične bolezni, tako da se štejejo kot označevalce SLE protiteles in njihova detekcija je eden od diagnostičnih kriterijev za bolezen. V navzočnosti SM-protiteles opazimo za maligne bolezni, centralni živčni sistem, lupus psihozo in relativno ohranitev funkcije ledvic. Vendar pa je raven protiteles proti Sm-antigen ni bilo povezano z aktivnostjo in kliničnih podvrstami SLE.

Protitelesa proti Ro (Robert) / SS-A usmerjeni proti jedrskih ribonucleoproteins, ki so povezani s il-Y5 citoplazemskega RNA, z RNA polimerazo III kopiranih. Glede na občutljivost uporabljenih metod za študij protiteles RO / SS-A so navedene v 60-78% bolnikov z Sjogrenov sindrom, pri 96% bolnikov z Sjögrenov bolezni in 35-57% bolnikov s SLE.

V SLE podatki o proizvodnji protiteles povezan z določeno nabor laboratorijskih in kliničnih manifestacij motenj: svetlobo, Sjögrenov sindrom, poškodbe pljuč, limfopenijo in trombocitopenija hyperproduction RF. Povečanje koncentracije protiteles proti Ro / SS-A v kombinaciji s hiper IgM RF je pogosto opaziti v ANF-negativne podtipa bolezni (pri 2-5% bolnikov s SLE) - ti subakutni kožni lupus.

Protitelesa proti La (Lane) / SS-B usmerjena proti proteinu, povezanega z transkriptov RNA polimerazo III. Protitelesa proti La / SS-B v večini primerov pojavijo v povezavi s protitelesi proti Ro / SS-A, ker lahko ta pojavi v izolaciji. Protitelesa proti La / SS-B najdemo v bolezni in Sjogrenov sindrom, v kombinaciji z RA in SLE (a ne sistemska skleroderma) in primarne biliarne ciroze. V SLE protitelesi proti SS-B / La-antigen pogosteje pojavi v zgodnjem obdobju bolezni, ki se razvija v starosti, in je povezan z nižjo incidenco razvoja nefritis.

SCL-70 protitelesa se običajno odkrijejo pri difuzni obliki sistemske skleroze. V prisotnosti bolezni SCL-70 protitelesa v kombinaciji z geni prevoznega HLA DR3 / DRw52 17-kratno povečanje tveganja za razvoj pljučna fibroza. Dokaz SCL-70 protitelesa pri bolnikih s pojavom izolirana Raynaudovim kaže visoko verjetnost razvoja sistemska skleroderma.

Antitsentromernye protitelesa (ASA) je dalo 20% bolnikov s sistemsko sklerozo (večina od njih obstajajo dokazi CREST-sindroma), vsaj - iz primarne biliarne ciroze (polovica teh bolnikov, obstajajo znaki skleroderma), in zelo redko - v kroničnim aktivnim hepatitisom in primarna pljučna hipertenzija. Protitelesa proti centromero šteje za neugoden prognostični kazalec razvoja sistemske skleroze pri bolnikih z Raynaudovim sindromom.

Protitelesa proti aminoatsilsintetaze tRNA (antisintetaznye protitelesa) sta odkriti v prisotnosti bolnikih z polimiositisom intersticijske pljučne bolezni. Na splošno so sintetaze protitelesa odkrili pri 40% bolnikov z polimiozitis, 54% bolnikov z idiopatsko dermatomiozitis v primeru oblik teh bolezni in le 6% bolnikov z polimiozitis, eden od drugih manifestacij med tumorja DBST- miozitis Ta protitelesa se ne zazna. Izdelki antisintetaznyh protiteles je povezana z razvojem tako imenovanih "antisintetaznogo sindrom."

Antifilaggrinovye protitelesa (apl) so družina, ki vključuje antikeratinovye protitelesa antiperinuklearny faktor protiteles SA-antigen in protitelesa za nedavno opisanem cikličen peptid, ki vsebuje citrulin. V skladu s sodobnimi koncepti, glavni antigenska determinanta teh protiteles izkažejo citrullinated peptidi, ki je zlasti prisotna v sinovialni ovojnici bolnikov z revmatoidnim artritisom (RA). AFA so zelo specifične za RA. Najbolj razširjeni so AFA pri diagnozi zgodnjega RA. Številne študije so pokazale bolj agresiven potek RA v prisotnosti teh protiteles pri bolnikih.

Protitelesa proti fosfolipidov (APL) - heterogena skupina avtoprotiteles, ki reagirajo z negativno nabitimi (fosfatidilserina, fosfatidilinozitol, kardiolipin) in nevtralne (fosfatidiletanolamina, fosfatidilholin) fosfolipidov. Ti vključujejo lupus antikoagulant, kardiolipina protitelesa in dejavnike, ki vplivajo na razvoj lažno pozitiven Wasserman.

Lupus antikoagulant (ZA) - imunoglobuline razreda IgG in / ali IgM, zavira vitro enem ali več fosfolipidzavisimyh koagulacije reakcijah je BA obravnava kot reprezentativne družine protiteles proti fosfolipidov, njihova sinteza povezana z razvojem arterijske ali venske tromboze.

Antikardiolipinska protitelesa (ACL). Za določitev CLA uporablja imunski način. CLA izdelki (predvsem kadar visoke titre IgG ACL), kakor tudi tvorba BA, ki je povezana z razvojem antifosfolipidni sindrom.

Lažno pozitivni Wassermann Reakcijsko je hiter serološki diagnozo sifilis, z metodo, ki temelji na standardnem brozgo flokulacije fosfolipida (kardiolipin) serum pacientov, ki vsebuje anti-treponemski protitelesa (reaginski test). Za natančnejšo diagnozo sifilis po metodi imunofluorescenčni treponemski antigen.

Pri 15-20% bolnikov s SLE zazna lažno pozitivni Vodar reakcijo, in 30% zdravih posameznikih z lažno pozitivni Vodar reakcijo pri poznejši razvoju SLE je. Zelo pogosto lažno pozitiven Wasserman odkrili pri bolnikih z antifosfolipidni sindrom.

Antinevtrofilna tsitoplazmatineskie protitelesa (ANCA). ANCA so družina avtoprotiteles zoper specifičnih antigenov, prisotnih v citoplazmi nevtrofilcev. Obstajata dve vrsti ANCA, da z metodo posredne imunofluorescence uporabo fiksnega Nevtrofilci absolutnih darovalcev alkohol določene. Protitelesa, da povzroči razpršeno proteinaze III (klasična) in citoplazemsko sijaj, označena kot k-ANCA ali p-ANCA. Protitelesa proti mieloperoksidaze, elastaza in laktoferinom značilno perinuclear vrsto emisij in imenovali perinuclear ali p-ANCA. ANCA so pogosto odkrijejo sistemskega vaskulitisa.

Streptokokov antistreptococcal infekcija povzroči povečanje titrov protiteles. Ugotavljanje antistreptococcal protitelesa se uporabljajo za diagnozo akutne revmatske vročice (akutna revmatična mrzlica) in akutni glomerulonefritis.

Najširše določitev protiteles proti streptolysin O (ASL-O), streptokinazo (ACK) in streptodezoksiribonukleaze (anti-DNaza B). Povečanje titrov SLA-O najdemo v več kot 2/3 bolnikih z akutno revmatske vročice in le polovica pacientov z akutno glomerulonefritis. Največje titre antistreptococcal protitelesa ugotovljene med razvojem artritisa in med razvojem karditisa in horea titre teh protiteles znatno zmanjša, kar zmanjšuje diagnostično vrednost tega preskusa.

Pomembno za diagnozo so Reakcijsko odkrivanje protiteles po okužbi: Vodar reakcije, reakcije vezanja komplementa s tuberkulozo, pseudotuberculosis, Yersinia, šigelozo in drugih antigenov, HBs-antigeni, gonokoki (Bordet-Gengou Reakcijsko) in bruceloza (reakcijski Wright-Heddlsona) antigeni titra anti-klamidijo protitelesa.

Cryoglobulins - skupina s serumskih proteinov z nenormalno sposobnost reverzibilne obarjanja ali tvorbo gela pri nizki temperaturi. Cryoglobulins mogoče zaznati v različnih bolezni notranjih organov, vključno s precej pogosto v sistemskih revmatičnih bolezni.

Glede na sestavo cryoglobulins je razdeljena v tri glavne vrste. Tip I sestoji iz monoklonskih imunoglobulinov IgA ali IgM, vsaj - monoklonska lahke verige (Bence Jones proteinov). Tipa II (opazili ti mešani cryoglobulinemia) sestavi monoklonskega imunoglobulina (običajno IgM, redko - IgA ali IgG), antiglobulinski ima aktivnost proti poliklonalno IgG. Tipa III (opazili ti mešani cryoglobulinemia) sestoji iz enega ali več razredov poliklonskih imunoglobulinov. Najpogostejša oblika cryoglobulinemia pri revmatičnih bolezni je on tip III se nahaja v SLE, RA, sistemska skleroza, Sjogrenov sindrom.

Obtoku imunskih kompleksov (CIC). Povečanje koncentracije odraža CEC vnetnih in imunoloških aktivnost patološkega procesa v SLE, RA seronegativne spondiloartropatij.

VI Mazur

Zdieľať na sociálnych sieťach:

Príbuzný