VWF antigen: določanje Postopek

Na površini plastične vdolbinico sorbirana protitelesa proti Willebrandov faktor. V prvi fazi raziskave v vdolbinico mikrotitrske plošče dodamo BTP vzorcev. VWF molekule so pritrjeni na ustreznih protiteles in ostane vezan ko jo speremo. V drugem koraku pri analizi vdolbino izdelavo poliklonska protitelesa. Na naslednji fazi preiskave v vodnjaku raztopine kromogena dodali. Ta snov je naslikal po encimsko prebavo. Intenzivnost obarvanja je odvisna od vsebine Willebrandov faktor.

Imunološka metoda za določanje faktorja Willebrandov se lahko izvede tudi s pomočjo raketni elektroforezo.

Koeficient variacije ELISA za določanje vWF: Ag je manj kot 10%.

Video: Določitev krvne skupine in Rh faktorja

Reagenti in oprema

• Pralni Koncentrat pufra (pH 7,3).
• Inkubacijska pufer (PBS- pH 7,3).
• Liofilizirane standardi.
• Liofilizirane kontrolni vzorci nizkih in visokih ravneh.
• Konjugat po poliklonskih protiteles.
• Raztopino substrata.
• Stop rešitev.

Videoposnetek: Blood (antigeni krvne skupine, Rh) [Je preprost]

Distributer Diagnostični komplet reagentov - CJSC "BIOHIMMAK".

Vzorce krvi za raziskave

Za izvedbo faktor preizkus Willebrandovega uporabo FFS.

tehnika uspešnosti

Gradnja umeritvene krivulje. Nadalje je treba izdelati umeritveno krivuljo z linearno koordinatni sistem. Za izdelavo umeritvene krivulje s pomočjo vrednosti absorbance, dobljene z raztopino vzorca z znano koncentracijo Willebrandov faktor. Na se os x uporablja za koncentracije vWF: Ag U / ml ali odstotka (1 E / ml = 100%) in os Y označuje absorbanco. V teh primerih, kjer so vzorci, katerih vrednosti absorbance večja od vrednosti najvišje točke kalibracije, morajo biti nadalje razredčimo z inkubacijskem pufru (1 + 1) in ponovno testirati. Zato je treba Nastalo koncentracija pomnožena s faktorjem redčenja.

Vrednotenje rezultatov študije

Koncentracija vWF: Ag pri zdravih ljudeh zelo različna. Predpisi so odvisne od različice diagnostičnega kompleta, opreme, krvi, reagenti, in še veliko več, tako da ni splošno sprejeta normalno območje pri merjenju tega kazalnika. normalno območje je običajno določeno v navodilih proizvajalca reagentov za določanje Willebrandov faktor, vendar mnogi proizvajalci priporočajo, da vsak laboratorij vzpostavi svoj razpon normalnih vrednosti. Pomembno je, da se spomnimo, da so povprečne vrednosti na ravni tega proteina s krvno skupino I približno 10% nižja od drugih pacientov, da je treba vedno obravnavati v diagnozi hemoragične bolezni.

Vzroki napak

• Odsotnost ali neučinkovitost sistema notranjega obvladovanja kakovosti. Trenutno so na voljo vzorci referenčnih materialov certificirani vrednosti z Willebrandov faktor. Glede na prisotnost bistveno različnih metodoloških pristopov za določanje beljakovin, ki jih je treba skrbno preveriti različico študije, za katere je bil certificiran testni vzorec.
• Nepravilno dozirna citrata na ograji venske krvi. Pomanjkanje natrijevega citrata zaradi nizke hematokrita in hemolize privede do napak in ne-ponovljive rezultate.
• Hemoliza.
• Povečanje vWF opazili v stresnih situacijah med vadbo, nosečnost, krvavitve, hipertenzija, nalezljive bolezni, estrogensko terapijo. Pri ženskah, o različnih dneh menstruacijskega ciklusa so lahko nihanja v koncentraciji Willebrandov faktor. Standardizirati hormonski vpliv na vsebino multimernega proteina, nekateri strokovnjaki priporočajo za diagnosticiranje Willebrandov bolezni pri ženskah med 5. in 7. dan menstrualnega ciklusa.

Druge analitične tehnike

Na žalost ne obstaja enoten postopek, ki se lahko upoštevajo vse od številnih različic tega proteina nepravilnosti, vendar za diagnosticiranje vWD je razvil vrsto laboratorijskih testov. Osnovne raziskovalne metode, ki se uporabljajo za identifikacijo pomanjkljivosti ali kvalitativno anomalij Willebrandov faktor, ki temeljijo na uporabi encimov tehnik imunološki. Poleg tega je za diagnozo bolezni učinkovito študija funkcijo agregacije normalnih trombocitov, zdravljenih z ristocetin dodajanje PRP preiskati. Za kvalitativno motnje diferenciacije molekulo tega proteina nadalje zaposlene in druge metodični pristopi.

Določanje aktivnost ristocetin-kofaktor Willebrandov faktor

Formalinom obdelan trombociti mogli opravljati veliko njenih funkcij, r. H. enot tvorbo in funkcijo kot odgovor na dodatkom najbolj znane funkcije seštevanja induktorji, vendar z dodatkom ristocetin v zmesi takih trombocitov in študije plazmi se hitro aglutinirajo. V tej testni sistem je resnost aglutinacije neposredno odvisna od prisotnosti von Willebrandovega faktorja, vendar z zniževanja koncentracije tega proteina ali njena kakovost enakovrednosti take aglutinacijo šibko izražen ali odsoten celoti. Obstajata dve možnosti prinitsipialno podobno metodologijo za določitev aktivnost ristocetin-kofaktor Willebrandov faktor. Izvor - kvantitativna, za njeno izvajanje zahteva agregometrom, drugi - semikvantitativno, gre za vizualno oceno časa pojavljanja Aglutinira v primesi razredčitev preskusne plazme in ristocetin formalinu zdraviti trombocitov. Obe metodi imajo koeficient variacije manj kot 10%.

Diagnostične metode treba razlikovati različic Willebrandov bolezni

Določanje kolagena vezavnega aktivnost faktorja Willebrandov. Lepljenje trombocitov k subendotelialnega kolagenskih vlaken realiziran s pomočjo receptorja krvnih ploščic GP-Ib / V / IX. Ta interakcija zahteva vWF kot kofaktor, tako da na anomalije multimerni protein ali njegov nezadostna zmogljivost moten trombocitov vezavo na kolagen receptorje. Za določitev aktivnosti kolagena veže zahteva vrsto reagentov in opreme za opravljanje ELISA. Njegov koeficient variacije ne presega 15%.

Določitev multimernega Willebrandov faktor. Sodobna razlika diagnoza večini variant tipa 2 vWD prav tako temelji na študiji multimerični Willebrandov faktor. Za oceno sposobnosti tega proteina, da se tvori multimer bolj uporabljajo imunski elektroforezo. Postopek za določanje multimerični precej zapleteno, zahteva opremo za imunski elektroforeza, primerna za izvajanje v specializiranih laboratorijih rutinsko opravljajo imunski elektroforeza, kompleti diagnostičnih za njeno izvajanje ni. Informacije o občutljivosti in specifičnosti te diagnostične metode v sodobni literaturi ni zastopana, vendar obstajajo poročila o predhodno neznanih različicah multimernega proteina, ki jo nekateri strokovnjaki štejejo za diagnostične artefaktov.

Določitev agregacije trombocitov z ristocetin (R1PA). Kršitev agregacije trombocitov z ristocetin inducirane je pogosta laboratorij Willebrandov manifestacija bolezni. Ta izvedba za identificiranje zelo specifična podtipa 2B Willebrandov bolezen, pri kateri je nenormalno visoka agregacija kot odziv na dodatkom nizkih koncentracij ristocetin. V drugih motenj, ta metoda je le drugotnega pomena, saj je običajno odmerjanje se lahko razdeli na različnih izvedbah te patologije. Za izvajanje te tehnike zahteva agregometrom in ristocetin. Študije ponovljivost združeno z ristocetin veliki meri odvisna od agregometrična modela, izkušenj in usposabljanje osebja.

Video: skupina Blood ga navzkrižnem ognju in Rh faktor