Adamts13

Tako je v normalnih pogojih ta proteaza cepi Willebrandov faktor multimeri in ustvarja normalno in nizko molekulsko maso.

Pomanjkanje ADAMTS13 ima pomembno vlogo v patogenezi trombotična trombocitopenična purpura (Moshkovitsa sindrom), ker velika multimere vWF so neuspeh tega metaloproteinaze odgovorne za nenadzorovano tvorbo mikroagregatov trombocitov, blokiranje mikrocirkulacijo. V zadnjih letih je zmanjšanje ADAMTS13 ni bilo mogoče najti le na mikroangiopatije sindromov, ampak tudi v kronični glomerulonefritis, sepsa, cirozo jeter, DIC, in še veliko več.

Princip metode

Princip metode (ELISA), ki temelji na specifične vezave ADAMTS13 molekul protiteles na površini mikroplošče. Po odstranitvi snovi, ki niso vezane na mikroplošče, inkubiramo s protitelesom encimsko označeno (konjugirano). Kot rezultat, na mikroploščnem površini pojavi pristopna protitelesa označeni z encimom kompleksi veljavne gena proti protitelesa. Dodano po spiranju 3,3`, 5,5`-tetra-metilbenzidin ovrednotiti encimska aktivnost testno zmes značilna obarvanja. Intenzivnost barve je sorazmerna s aktivnost encimov in zato število ADAMTS13 v vzorcu.

Video: TTP ADAMTS13

Reagenti in oprema

• Mikroploščnem vrtine prevlečena s protitelesi proti ADAMTS13.
• Vzorec pufer.
• Pralni pufer.
• Raztopino kromogena / substrata (kromogena - tetrametilbenzidina, substrata - vodikovega peroksida).
• Stop Solution.
• Oprema za opravljanje ELISA (pranje, bralnik za tablične računalnike in druge.).

Distributer Diagnostični komplet reagentov - CJSC "BIOHIMMAK".

Vzorce krvi za študij kot vzorec za določanje koncentracije ADAMTS13 PBB uporabi stabiliziranega natrijevega citrata polni krvi.

tehnika uspešnosti

Zaporedje ukrepov laboratorij zdravnik pri določanju ravni ADAMTS13 treba strogo upoštevati navodila za niz reagentov. Kalibratorji priporočljivo raziskati podvojene definicij.

Video: ADAMTS13 Teil 1

Rezultati ocenjevanja študije ugotoviti, da je koncentracija ADAMTS13 treba zgraditi kalibracijske krivulje. Na umeritvene krivulje ležala vrednosti absorbance, dobljene z merjenjem primerki kalibracijske. Nato se medsebojno povezani točka izvedemo umeritvena krivulja za določanje koncentracije ADAMTS13 ( "točke do točke"). Običajno je koncentracija ADAMTS13 je 50-140%.

Razlaga rezultatov ADAMTS13 študije - metalo cepi Willebrandov faktor. Nizka koncentracija in / ali zmanjšano ADAMTS13 aktivnost idiopatski vzrok trombotična trombocitopenična purpura (Moshkovitsa sindrom). Moshkovitsa sindrom označen s pet glavnih kliničnih simptomov: nevrološke motnje, okvare ledvic, hemolitična anemija, trombocitopenija, vročina. Bolezen je težko, brez zdravljenja pathogenetically temelji smrtnost doseže 90%. Sindrom Moshkovitsa pogosto kažejo zmanjšanje koncentracije ADAMTS13 manj kot 10%. Vendar pa veliko bolj koristno za diagnosticiranje te patologije je določitev ADAMTS13 dejavnosti, kot v tem primeru, razen za količinsko zmanjšanje tega zaviranja je mogoče zaznati metalo-avtoprotitelesa.

Mutacije genov, ki nadzorujejo sintezo ADAMTS13, ki so sposobni, da se določi pogoste recidive trombotična trombocitopenična purpura. Klinični znaki sindroma podedoval pomanjkanja ADAMTS13 imenuje Upshaw-Schulman (Upshaw-Schulman). Na tej ravni sindrom ADAMTS13 je manj kot 6,7%.

V času pisanja monografij, žal, niso opredeljeni jasno razločevalne lastnosti trombozo trombocitopenična purpura in hemolitični uremični sindrom. Vendar pa večina strokovnjakov pogosto mislijo, da je sindrom hemolitično-uremični ni opaziti zmanjšanje ADAMTS13, tako da je ta številka je zelo pomembna za diferencialno diagnostiko teh smrtno nevarnih razmerah.

Vzroki napak

• Neuspeh Temperatura način za shranjevanje reagenta.
• Postopki kršitve pranje (pri ročnem pranju je treba oprati vsaj 4-krat).
• Mešanje reagentov iz različnih sklopov.
• Vlaga v vdolbinice (da se prepreči pojav kondenzacije ne sme biti odprt do paketa, dokler se ne segreje na sobno temperaturo).

Druga analitična tehnologija dodajanje reagentov za merjenje koncentracije ADAMTS13 je metoda za določanje aktivnosti metalo. Pomanjkanje aktivnosti z mutacijo ali prisotnosti avtoprotiteles proti ADAMTS13 povzročil.