Razvoj in uporaba metod za določanje serotip kroži genotipov virusa hepatitisa C.

Hepatitisu C (TOS) se nanaša na vozbuditelyams zelo izrazit heterogenost populacije. Ugotovljeno je bilo, da je pri bolnikih s kronično HS, povezane z različnimi genotipamivirusa, različno odzivajo na virus interferonoterapiyu.Opredeleniegenotipov HS pomembno pri epidemioloških študijah, saj omogoča prenos dobro dokumentirane patogena.

Namen te študije - oceniti vozmozhnostimetoda serotipizacij določiti genotipe HS. Dlyaserotipirovaniya je bil sprejet iz izvirnega načina, opisannyygruppoy raziskovalci iz Velike Britanije pod P.Simmonds orientacije (1993,1995). 12 kratke peptide (18-19 aminokisline), ki predstavljajo epitopov proteina NS4 6 genotipov kmetijsko bili poluchenymetodom sinteze trdne faze, čiščenje s pomočjo kromatografije in vysokoeffektivnoyzhidkostnoy se uporabljajo kot podlaga za imunološki immunosorbentadlya s serumi soderzhaschimiantitela do NS4 proteina (anti-NS4) . Prisotnost anti-NS4 podtverzhdalosv ELISA z mešanico peptidov za serotipizacij ali po imuno (LiaTek HCV, Organon Teknika- Wellcozyme HCV Western Blot, Murex).

Specifičnost določanje genotipov težka razarabotannymvariantom serotipizacija preučevali s primerjavo rezultatov "slepega" testne plošče 154 serumov anti-NS4-pozitivnyhobraztsov z znanimi genotipov (razen 1 vzorec) definirana z uporabo postopka, opisanega RFLP P.Pohjanpeltoet al. (1996) na Oddelku za virologijo Univerze v Helsinkih.

Za preučevanje širjenja variantovvirusa GS na nekaterih območjih Rusije (St. Petersburg, Nižni Novgorod, Ufa, Belgorod) in sosednjih držav (Belorusija, Kazahstan, Gruzija) z serotipa smo testirali proti NS4-pozitivnyesyvorotki prejeli od 474 ljudi, med njimi 157 krvodajalcev , 237 bolnikov s hepatitisom C in 80 oseb ogrožene (vnutrivennyenarkomany, bolnikih z rakom, pacienti hronicheskogogemodializa centrih, bolnišnicah in drugih tuberkulozo.).

Rezultati "slepih" testiranje 154 syvorotoks znanih genotipov virusa hepatitisa C s tipizacijo predstavila tabelo №1. V splošnem serotipirovano 148 vzorcev (96,1%). Polnoesovpadenie žveplo in genotipov opazili pri 130 148 serumov (87,8%). Za posamezne genotipov bila ta številka razlichnym.Naibolshaya frekvenca ujemanja rezultatov opazili za HCV-1 - (92,5%) z indeksom trosenje 87,1% za serumov subtipa1v do 100% za serume z mešanim podtipov 1a + 1v- za HCV- 3- 94,3% (all seruma obdelamo podtipa 3a). Najmanjša Rezultati protsentsovpadeniya opazili pri testiranju serumov na RFLP pripada HCV-genotipom 2 (80%). Pri 5 serotipirovaniibylo Zaznali serumov, ki se lahko pripiše genotipuHCV-4. Vendar, če primerjamo rezultate s podatki RFLP sovpadenieotmecheno Samo 2 vzorcev (40%).

Visoka korelacija Rezultati odkrivanje genotipovvirusa GS prejela dve popolnoma različne metode za preučevanje pozvolilaispolzovat serotipa kroži GS variantovvirusa v ločenih območjih. Rezultati tega dela issledovaniysummirovany v tabeli №2. Na splošno velja, vse raziskano territoriyahvyyavlena obtoku 3 genotipov HS v enotnem sluchayahv štiri regije definirano HCV-4 genotip. Najpogosteje opredelyalsyagenotip HCV-1 (od 47,1% v serumih iz Gruzije do 74,4% - od Belorusija) .Vtoroe mesto uvrstitev na stopnjo odkrivanja vseh ozemelj, zasedenih prakticheskina HCV-genotipa 3 (15,5% v serumih Belorussiido 34,0% - od Novgorod). Veliko manj je študiral syvorotkisoderzhali vrsta specifičnih anti-NS4 HCV-2. Največja chastotavyyavleniya to genotip je bil nameščen v serumu Belorusiji (12,7%), Kazahstana (13,7%), in najmanj - v serumih iz Sankt Peterburga (3,8%). V 35 serumih iz vseh regij proučevanih z serotipizacije ugotovi prisotnost anti-NS4 različnih genotipov (genotipov mešane). Največji delež serumov iz vzorcev smeshannymigenotipami sestavljene v kateri sta opredelyalisHCV-1 in HCV-3 (26 35-74,3%), in sicer najpogosteje vstrechayuschiesyagenotipy. Drugih različic kombinacije izpolnjeni znachitelnorezhe - HCV-1 + HCV-2 (8,6%), HCV-2 + HCV-3 (11,4%). HCV-1 + HCV-4 v kombinaciji pokazala dva serume Georgia (5,7%).

Materiali te študije svidetelstvuyuto, da je uporaba sintetičnih peptidov, sootvetstvuyuschihantigennym Dejavniki brez strukturnih beljakovin NS4, v kachestveosnovnogo komponente imunski test ELISA omogoča uspeshnoopredelyat genotipov virusa v serumu okuženih kmetij etimvozbuditelem ljudi in spremlja kroženje genovariantovvozbuditelya regijah.

Za določanje genotipov težka ispolzovanmetod PCR-RFLP s tipsko specifičnih restrikcijskih fermentamiBst U1 in BST N1 in kasnejšo analizo restrikcijskih izdelkov s pomočjo horizontalnega elektroforezo v 3% agaroznem gelu (ThiersV. Et al., 1997). Ta metoda je bila preizkušena serumih bolnikov s kronično krovi15 GS prejemali interferon. RNKvirusa GS odkrita v 14 vzorcih, medtem ko je v 6 primerih (42,9%) montiran subgenotip 3a, 3 (21,4%) - 1 gentip (2- subgenotip1v 1 - subgenotip 1a). virusna RNA GS, izolirani od 4 do obraztsovotnosilas redko zaznavne patogenih genotipov - 4/5. Poslednienahodki zahtevajo dodatni nadzor.

Tabela 1. SOPOSTAVLENIE PEZULTATOV OPPEDELENIYAGENOTIPOV VIPUSA GEPATITA Z METODAMI tipizacijo SEPOTIPIPOVANIYA

PPIMECHANIE: * - ne tipipovalos ** - abs.chislo / odstotek;

Tabela 2. CHASTOTA ODKRIVANJE PAZLICHNYH GENOTIPOVVIPUSA GEPATITA z metodami SEPOTIPIPOVANIYA HA OTDELNYHTEPPITOPIYAH Possii In SOPPEDELNYH STPANAH

PPIMECHANIE: * - abs.chislo syvopotok s dannym genotipom /% (100 nA z syvopotok ukazannoy teppitopii)

Reference:

1. 1.Pohjanpelto P., Lappalainen M., Widell A. et al.// Clin.Diagn.Virol.-1996. -Vol.7. -P. 7-16
2. 2.Simmonds P. Holmes E.C., Cha T.A. et al.// J.Gen.Virol.-1993-Vol.74.-P. 2391 -2399